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[目的]进行胃癌细胞原代培养，建立Ming氏浸润型胃癌细胞系。[方法]通过组织块法和消化法进行胃癌原代培养，优化细胞外基质、培养基及促生长物质等建立高效的原代培养体系，经反复消化贴壁纯化并传代建立Ming氏浸润型胃癌细胞系。通过光镜和电镜形态学观察、细胞免疫组化、糖原染色、倍增时间、核型分析、琼脂糖克隆实验、动物体内成瘤实验分析细胞特性。[结果]胃癌原代培养胶原酶消化法获取胃癌细胞数量多、纯度高；培养皿预铺细胞外基质纤连蛋白能促进细胞贴壁生长，其效果具有统计学差异（P<0.0001）；不同培养基对原代培养效果不同，除培养基L15与F12间无差异性外（P>0.05），其他培养基间均存在差异，其中培养基DMEM/F12对原代培养效果最优；不同促生长物质中hEGF和bFGF促进细胞生长最明显，低血清浓度培养基中加入促细胞生长物质其效果与中-高血清浓度培养基相同（P>0.05）。原代培养经纯化传代建立Ming氏浸润型胃癌细胞系，形态学光镜下多呈梭型和卵圆型，核大深染，核浆比例大，符合癌细胞特性。透射电镜下细胞胞浆量及细胞器相对减少，游离核糖体增多，线粒体肿胀明显。该细胞系传代过程中形态学上无明显改变。细胞培养过程中可叠加团块状生长并于低营养时成团脱落，营养丰富时重新贴壁生长；细胞免疫组化染色角蛋白阳性、波形蛋白阴性、Ki-67≈75%；糖原染色示细胞分泌糖原类物质；细胞倍增时间约47.86小时；核型三倍体，染色体69条， Y染色体丢失，可见费城染色小体；细胞可在低熔点琼脂糖中形成克隆，成瘤率72%；裸鼠体内成瘤实验阳性。[结论]本实验建立的低血清胃癌原代培养体系可用于获取大量高纯度原代胃癌细胞，并可传代建立胃癌细胞系。建立的Ming氏浸润型胃癌细胞系具有活力强、成瘤率高、恶性度高和具有转移瘤特性等特征。