论文部分内容阅读
背景:急性肺损伤(ALI)是一种严重的疾病,也是造成危重患者出现并发症与死亡的主要因素之一。目前最常用于治疗ALI的方法是机械通气,机械通气能够为危重患者提供必要的生命支持,但是会导致肺功能和结构的改变。间充质干细胞(MSCs)疗法是一种很有前景的新疗法,被认为能够治疗急性肺损,但是其治疗机制尚不明确。糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)与多种疾病的发生有关,因此假设GSK-3β能够作为急性肺损伤的治疗靶点。目前的研究中,我们侧重于探究可能增强干细胞疗效的因素,哪些能够改善干细胞治疗的疗效。本研究旨在探索在体内间充质干细胞用于治疗急性肺损伤中,联合使用GSK-3β选择性抑制剂LiCl的作用。方法:实验选用40只成年SD大鼠,随机分为4组:1.对照组(5mg/kg生理盐水),n = 10.2.急性肺损伤组(ALI)(15 mg/kg 脂多糖(LPS)),n=10.3.ALI+MSCs组(LPS作用2 h后,尾静脉注射MSCs治疗),n = 10.4.ALI+MSCs+LiCl 组(LPS 作用 2 h 后,MSCs 和 20 mg/kg LiCl治疗).实验中,每隔24 h注射一次LiCl以保持血药浓度。在第12 h收集血清,用ELSA方法检测炎症细胞因子的浓度变化。实验第7天采集肺组织,RT-PCR方法检测肺泡上皮细胞膜蛋白A,C(SP-A,C)的基因表达以确定肺泡上皮Ⅱ型细胞的变化,以及Wnt/β-catenin信号通路上的β-catenin和GSK-3β基因表达情况。分别在第7、14天利用WB、苏木素和马松染色方法分别检测β-catenin蛋白的表达情况和肺组织变化。最后,用形态学分析表示胶原纤维的面积百分比。结果:结果显示,在LPS模型中,用GSK-3β抑制剂(LiCl)辅助MSCs治疗组可更有效的抑制血清中的炎症因子的表达,且SP-C的mRNA的表达显著升高。此外,实验第7天,与MSCs组相比,MSCs联合LiCl组的炎症细胞浸润程度,肺水肿,病理损伤和胶原沉积均显著下降。第14天与第7天相比,肺组织中β-catenin的蛋白表达,不规则细胞和胶原沉积均显著增多。结论:本研究可以看出GSK-3β抑制剂在体内急性肺损伤早期治疗中(<7天)可明显提高MSCs的治疗作用。但过多的使用GSK-3β的抑制剂则可引起β-catenin的异常表达,即导致纤维化阶段(>14天),同时引起不规则的细胞增殖。