【摘 要】
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研究背景与目的克罗恩病(CrohnsDisease,CD)是胃肠道慢性炎症性疾病,主要结局是肠腔狭窄和肠梗阻。消化道是具有主要机械功能的电兴奋组织,这些机械力作为生理刺激和反馈信号来维持正常的生理功能。小肠粘膜上皮细胞是肠蠕动过程中的一种机械传感器,通过将机械信号刺激转化为细胞内的生化反应。Piezo1属于机械敏感的非选择性阳离子通道,具有明确的生物物理和药理学特性
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研究背景与目的克罗恩病(CrohnsDisease,CD)是胃肠道慢性炎症性疾病,主要结局是肠腔狭窄和肠梗阻。消化道是具有主要机械功能的电兴奋组织,这些机械力作为生理刺激和反馈信号来维持正常的生理功能。小肠粘膜上皮细胞是肠蠕动过程中的一种机械传感器,通过将机械信号刺激转化为细胞内的生化反应。Piezo1属于机械敏感的非选择性阳离子通道,具有明确的生物物理和药理学特性,可以直接被机械力激活,被认为是细胞机械敏感性的主要参与者。当CD患者发生肠腔狭窄时,肠道内的高压是否对小肠粘膜上皮细胞中的Piezo1产生影响,小肠粘膜上皮细胞Piezo1是否参与CD炎症和纤维化机制目前尚不明确,因此研究Piezo1对CD患者肠道炎症和纤维化的关联性及可能机制对CD患者的防治具有重要意义。方法1.回顾性收集近10年于安徽医科大学第一附属医院有手术记录的CD患者的临床资料,根据出院诊断为CD并有行肠道手术记录的患者,共收集到病例154例,排除诊断不明确、病历不完整、病理不符合CD要求、术后随访发现不符合CD自然病程以及失访,最后符合CD诊断标准的共有57例。同时收集10例在我院行肠镜检查的体检人群的正常小肠粘膜上皮组织作为对照组。2.根据收集的CD患者的临床资料,整理病灶手术标本病理号,至我院病理科调取小肠标本蜡块,使用石蜡切片机(规格:RM2255)进行组织切片,厚度3um,并进行HE染色和Msson染色,CD患者的另外两个切片标本进行免疫荧光组织染色(IF)和免疫组织化学染色(IHC);同时收集到10例正常体检人群的小肠粘膜组织,用OCT制成冰冻组织标本,使用冰冻切片机(规格:CM3050S)进行切片,厚度6um,分别进行IF染色、IHC染色、HE染色和Masson染色。CD组和对照组所有染色的切片标本均在激光扫描共聚焦显微镜(LSCM,规格:LSM800)下进行观察小肠粘膜上皮细胞Piezo1的表达和分布及炎症、纤维情况,对各参数进行统一调置,获得荧光和明场图片,对所有图片保留CZI和TIFF两种格式。3.将拍出的IF图片使用ImageJ进行半定量分析,HE染色的图片使用CD粘膜活检标本组织学评分系统(GHAS)及纤维化评分量表对肠道组织的炎症、纤维情况进行评分,炎症及纤维化评分均由病理科有资历的医师进行评分。结果1.收集到符合诊断标准的CD患者57例,回肠型29例(50.9%),回结肠型26例(45.6%),结肠型2例(3.5%),年龄大于17岁、小于等于40岁有32例(56.1%),大于40岁25例(43.9%);吸烟者5例(8.8%),非吸烟者52例(91.2%);非穿透非狭窄型患者12例(21.1%),狭窄型患者31例(54.3%),穿透型患者14例(24.6%);采用CDAI评估疾病活动性的严重程度,轻度0例,中度47例(82.5%),重度10例(17.5%);正常对照组小肠粘膜上皮组织10例。2.对CD组和正常对照组的病理组织切片进行IF和IHC染色,并采用LSCM进行摄片,IHC染色显示小肠粘膜上皮细胞表达Piezo1,使用ImageJ软件对拍摄的荧光图片进行半定量分析发现,CD组患者小肠粘膜上皮细胞Piezo1相对表达量水平明显高于正常对照组,差异具有统计学意义(CD组:12.94±4.58、正常对照组:8.54±1.10,P=0.012),提示CD患者小肠粘膜上皮细胞Piezo1表达增高,可能参与CD患者的病理生理过程。3.在CD组中,小肠粘膜上皮细胞Piezo1的相对表达量在病变部位、疾病严重程度上无明显差异性;小肠粘膜上皮细胞Piezo1的表达在不同的生物学行为上具有明显差异,P
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