人蜕膜条件培养液对卵巢癌细胞系COC1侵袭相关基因表达的影响

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目的: 本研究通过观察蜕膜条件培养液对卵巢癌细胞系COC1侵袭相关基因MMPs/TIMPs及uPA/PAI-1表达的影响,探讨DCM对COC1的MMPs/TIMPs及uPA/PAI-1表达的调控作用以及DCM中细胞因子TNF-α及EGF在该过程是否发挥作用。 方法: 1.用胰酶消化法原代培养人早孕及晚孕蜕膜细胞(n=6),制备DCM。利用免疫组化法对培养的蜕膜细胞纯度进行鉴定。传代培养卵巢癌细胞系COC1。 2.分别用无血清DMEM培养液(对照组)、含15%早孕DCM的DMEM培养液(早孕组)、含15%晚孕DCM的DMEM培养液(晚孕组)培养COC124h;用RT-PCR法检测卵巢癌细胞系COC1相关侵袭基因MMPs/TIMPs及uPA/PAI-1表达的变化。 3.分别用含15%早孕DCM的DMEM培养液(对照组)、含15%早孕DCM及TNF-α抗体(抗体终浓度10ng/ml)的DMEM培养液(TNF-α抗体处理组),含15%早孕DCM及EGF抗体(抗体终浓度10ng/ml)的DMEM培养液(EGF抗体处理组)各自培养COC124h;用RT-PCR法检测COC1相关侵袭基因MMPs/TIMPs及uPA/PAI-1表达的变化,并观察DCM中细胞因子TNF-α及EGF对上述基因表达的影响。 4.同时用Transwell细胞侵袭系统检测上述不同处理因素对卵巢癌细胞系COC1细胞的体外侵袭能力的影响。 结果: 1.卵巢癌细胞系COC1表达MMP-2mRNA、TIMP-2mRNA、PAI-1mRNA,而不表达MMP-9mRNA、TIMP-1mRNA及uPAmRNA。早孕及晚孕DCM能显著下调COC1MMP-2mRNA的表达,二者与对照组比较有显著差异(P<0.01)。早孕组与晚孕组比较,后者对Coc IMMP一ZmRNA表达的下调作用强于早孕组,且差异显著(P<0.01)。早孕及晚孕ocM处理Cocl,可以上调其TIMP一2mRNA及PAI一lmRNA的表达,与对照组比较有显著差异沪<0.01)。早孕组与晚孕组比较,后者对CoclTIMP一ZmRNA及PAI一mRNA表达的上调作用强于前者,且差异显著(P<0.01)。 2.EGF一Ab组与对照组(DCM组)比较,前者可以使COCIMMP一ZmRNA的表达降低,且有显著差异(尸<0.01);说明早孕DCM中EGF增加了CoclMMP一ZmRNA的表达。而TNF一Q抗体组可以降低MMP一ZmRNA的表达,但与对照组比较无显著差异(介0.280);说明早孕ocM中TNF一a有增加CoclMMP一ZmRNA表达的趋势。与DCM组比较,EGF一Ab组可以使COCITIMP一ZmRNA的表达增加,二者之间有显著差异(P<0.ol);说明早孕DCM中EGF可以降低COCI TIMP一ZmRNA的表达。而TNF一a抗体组有增加TIMP一ZmRNA表达的趋势,但无显著差异(尸>0.05);说明早孕DCM中TNF一a有增加CoclTIMP一ZmRNA表达的趋势。 3.TNF一a抗体组与对照组比较,Coc1PAI一lmRNA的表达增加,且差异显著(尸<0.01);说明早孕DCM中TNF一a可以降低Cocl PAI一lmRNA的表达。EGF抗体组PAI一lmRNA的表达有下降,且与DCM组比较有显著差异(尸<0.01)说明早孕DCM中EGF可以增加Cocl以卜lmRNA的表达以I一1mRNA。 4.细胞体外侵袭实验结果表明,早孕及晚孕DCM可以降低Cocl的体外侵袭作用,且二者与对照组(DMEM组)比较有显著差异(P<0.05)。晚孕组与早孕组比较,前者抑制力有增强的趋势,且有显著差异(P<0.05)。TNF一a抗体组与对照组(DCM组)比较,有增加Cocl侵袭能力的趋势,但无显著差异(P>0.05);说明早孕DCM中 TNF一“有降低Cocl侵袭能力的趋势。EGF抗体组与对照组比较,EGF抗体组有降低Cocl侵袭力的趋势,但无显著差异俨》0.05);说明早孕DCM中EGF有增强Cocl侵袭能力的趋势。结论: 1.人早期及晚期妊娠蜕膜细胞条件培养液(DCM)均通过降低Cocl侵袭基因MMP一ZmRNA的表达,同时增加TIMP一ZmRNA的表达,从而降低卵巢癌细胞系(C ocl)的侵袭能力;而且晚孕DCM较早孕DCM具有更强抑制Cocl侵袭能力的作用。 2.早孕DCM中TNF一a在mRNA水平上降低MMP一ZmRNA和TIMP一ZmRNA的表达,而且MMP一ZmRNA降低的幅度大于TIMP一ZmRNA的幅度,说明TNF-a在抑制Cocl侵袭力方面发挥作用。早孕DCM中EGF在mRNA水平上增加MMP一ZmRNA的表达,同时降低TIMP一ZmRNA的表达,说明EGF在促进Cocl侵袭力方面发挥作用。 3.早孕DCM及晚孕DCM可增加Coc1PAI一lmRNA的表达;而且早孕DCM中TNF一a及EGF均增加PAI一lmRNA。但因COCI不表达uPA,故推测纤溶酶原系统未参与Cocl侵袭能力的调节。
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