啤酒废酵母中β-1,3-D-葡聚糖的制备及性质研究

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啤酒酵母细胞壁中含有的30%~60%β-葡聚糖(干重),是最好的活性免疫多糖之一。我国年产啤酒废酵母超过6万吨(干重),绝大多数直接排弃或简单加工成普通饲料廉价售出,附加值低,如果能将啤酒废酵母中的β-葡聚糖提取并加以应用,将会产生巨大的社会效益与经济效益。本文以啤酒废酵母为原材料,采用自溶-热水浸提-超声破壁-酶碱法提取β-1,3-D-葡聚糖,对影响酵母自溶、热水浸提和超声破壁的一系列关键性因素进行了探讨,同时对β-1,3-D-葡聚糖产品的纯化方法和性质特征进行了深入的研究,主要研究结果如下:1.以啤酒废酵母为原材料,通过单因素试验和正交试验对啤酒废酵母自溶进行了研究,得到了啤酒废酵母自溶最佳工艺条件:自溶温度50℃,自溶pH5.0,NaCl添加量为3%(w/w),自溶时间24h。2.采用单因素实验和U5(52)均匀表设计方法对啤酒废酵母热水浸提条件进行了研究,获得热水浸提最佳条件为浸提温度115℃,浸提时间4h。3.采用单因素试验和Box-Behnken正交析因素试验优化超声破壁工艺,获得影响啤酒废酵母超声破壁的主要因素是超声功率X2,其次是超声时间X3和超声温度X4;优化得到超声破壁的理想条件为酵母质量浓度200g/L,超声功率800W,超声时间80min,超声温度50℃。4.比较了碱法、酸碱法、酶法和酶碱法四种去除蛋白质的方法,其中酶碱法处理成品蛋白质含量最低,纯度最高达到90.63%,得率达到10.31%,相比马森等人用超声酶碱法制得的产品得率10.21%,纯度88.14%,产品得率和纯度进一步提高。5.通过溶解性分析、颜色反应检测、薄层层析和红外光谱分析,本试验制得的产品为纯度较高的具有生理活性的碱不溶性酵母β-1,3-D-葡聚糖,且产品中不含甘露聚糖。6.得出了一条合理的提取高纯度酵母β-1,3-D-葡聚糖的制备工艺:啤酒废酵母加蒸馏水离心(4000r/min,10min)洗涤,至上清液澄清且无明显啤酒味;沉淀加蒸馏水配成10%(w/w)的悬浮液,按3%(w/w)的浓度添加NaCl,用食品级盐酸调pH5.0,50℃保温自溶24h后,115℃高压下,热水浸提4h,离心,收集沉淀,然后配成酵母质量浓度为200g/L的酵母悬浮液,控制超声功率800W,超声温度50℃,超声80min超声破壁处理,离心,沉淀按料液比(w/v=1/3,w:废酵母湿重,以g计,v:蒸馏水体积mL,下同)加蒸馏水,按200u/g底物的添加量添加木瓜蛋白酶,60℃,pH6.0,酶解8h,离心,沉淀按固液比(w/v=1/5)加3%的NaOH溶液,75℃处理3h,离心,水洗,无水乙醇(w/v=1/2)洗1次,冷冻干燥,得成品。
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