菊酯降解菌的筛选及降解酶基因的克隆

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  本文从农药厂的污泥中筛选到7株能降解菊酯类农药的细菌,并选取了一株降解效能高的菌株J-2作为本论文的研究对象。通过对降解菌株J-2生理生化的研究和16SrDNA分子鉴定,初步鉴定该菌株为Klebsiellasp.根据目前的文献来看,这是降解菊酯农药的一个新种。菌株J-2能以菊酯为唯一碳源进行生长。该菌株降解菊酯的最适温度是35℃,最佳pH是7.0。除此以外,还研究了其它外界环境条件对菌株Klebsiellasp.J-2的生长和降解效能的影响。菌株J-2产生的菊酯降解酶为胞内酶,该降解酶的最适反应条件是:温度45℃,pH是6.5。以氯氰菊酯为底物,在一定条件下粗酶的米氏动力常数是:Km=10.25μM,Vmax=114.94μM/min。通过构建该菌株的基因组文库,我们从该文库中筛选到了含该降解酶基因的3.6kbHindⅢ片段。该片段含有一个编码637个氨基酸的开放读码框。DNA序列分析表明:该开放读码框与Salmonellaentericasubsp.etericaerovarCholeraesuis的预测蛋白hypotheticalproteinSC171(登录号:AAS76447.1)有88%一致性。   鉴于本文筛选的菊酯类农药降解菌J-2具有较广泛的生长温度和pH适宜范围、广泛的底物降解谱以及对多种金属离子都有比较好的耐受性。因此该菌株的开发利用可以用来解决因菊酯类农药引起的环境污染问题。由于该降解酶基因在NCBI上比对结果仅与细菌的一些预测蛋白有同源性,到目前为止尚未见有菊酯类农药降解基因的报道,因此该基因可能是一个新的农药降解基因。该基因登录号是AY995176。
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