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目的:1、研究司他夫定(D4T)、齐多夫定(AZT)和去羟肌苷(DDI)对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响。2、观察D4T、AZT和DDI对处于增殖和分化过程中的3T3-L1前脂肪细胞分泌胰岛素样生长因子—1(IGF-1),以及成熟脂肪细胞分泌脂联素(APN)的影响。通过上述研究,探讨HIV/AIDS患者接受高效抗逆转录病毒治疗(HAART)后出现脂肪萎缩的发生机制。方法:1、将不同浓度的D4T、AZT和DDI(0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml)作用于CFSE标记的3T3-L1前脂肪细胞,应用流式细胞仪测定细胞增殖情况。2、选择D4T(1μg/ml、4μg/ml)、AZT(0.1μg/ml、1μg/ml)或DDI(1μg/ml、10μg/ml)作用于3T3-L1前脂肪细胞,使用MTT比色法测定细胞增殖情况。3、将不同浓度的D4T、AZT和DDI(0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml)作用于3T3-L1前脂肪细胞,诱导分化至第8天,使用油红0脂肪染色法观察细胞分化情况。4、收集3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化过程中的培养上清液,应用ELISA方法测定APN和IGF-1水平。结果:1、流式细胞仪CFSE标记法检测结果显示,与对照组相比,不同浓度D4T干预组(0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml)的增殖指数降低程度分别为19.1%、39.8%和50.8%;AZT干预组(0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml)的降低程度分别为6.7%、18.1%和30.9%。MTT比色法也证实D4T和AZT能够减弱3T3-L1前脂肪细胞的增殖能力。2、高浓度D4T(10μg/ml)和AZT(10μg/ml)能够抑制3T3-L1前脂肪细胞分化能力,造成成熟脂肪细胞数量减少。3、ELISA检测结果发现,在细胞增殖过程中,与对照组相比,不同浓度D4T干预组(0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml)中的IGF-1含量下降程度分别为21.5%、31.7%和48.7%;D4T还能降低分化第8天的成熟脂肪细胞分泌IGF-1的能力,呈浓度依赖性,下降程度分别为10.5%、30.7%和42.6%;而AZT(0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml)仅能降低增殖过程中前脂肪细胞分泌IGF-1的能力,与对照组相比下降程度分别为8.6%、21.7%和29.5%。4、与对照组相比,在10μg/ml的D4T干预组和AZT干预组中,成熟脂肪细胞分泌的APN水平下降。5、DDI对3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化和IGF-1、APN的分泌未见明显影响。结论:1、本研究首次发现D4T能够降低3T3-L1前脂肪细胞的增殖能力,为浓度依赖性;同时证实AZT能够降低3T3-L1前脂肪细胞的增殖能力。2、本研究证实了D4T和AZT能够抑制3T3-L1前脂肪细胞分化能力,使成熟脂肪细胞数量下降。3、本研究首次在体外实验中发现,D4T和AZT均能够减弱增殖过程中的前脂肪细胞分泌IGF-1的能力,呈浓度依赖性;D4T还能够减弱成熟脂肪细胞分泌IGF-1的能力。4、本研究证实了D4T和AZT能够使成熟脂肪细胞分泌的APN含量下降。由此,D4T和AZT可能通过影响前脂肪细胞的增殖、分化及脂肪因子分泌等途径,导致脂肪萎缩的出现。