多聚左旋精氨酸对NCI-H292细胞炎症介质调节作用的研究

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目的:研究NCI-H292细胞在多聚左旋精氨酸(Poly-L-arginine)联合脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作用于下白介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-8、IL-13、嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)的表达水平,以及肝素和L-单甲基-精氨酸(L-NG-monomethyl-arginine,L-NMMA)对其细胞因子表达的影响。方法:1.细胞培养及哮喘微环境模型的建立将NCI-H292细胞培养在含10%胎牛血清的常规培养基中,每周传代两次;选择生长状态良好的细胞以3×105/500μl密度接种于24孔培养板中,用LPS预先将气道上皮细胞激活,模拟哮喘气道上皮细胞模型。2.细胞因子水平的测定按照实验设计分为空白对照组(培养液)、LPS组(5μg/ml)、多聚左旋精氨酸组(Max=40μg/ml)、LPS+poly-L-arginine组、LPS+poly-L-arginine+肝素(100u/L)组、LPS+poly-L-arginine+L-NMMA(Max=0.8mM)组,并依照分组要求加入不同浓度的多聚左旋精氨酸、LPS、肝素、L-NMMA;共培养20小时,收集细胞上清液。按照试剂盒说明采用ELISA法检测各组IL-6、IL-8、IL-13、Eotaxin的表达水平,并比较各组间的差异。3.统计学处理实验数据采用SPSS16.0统计分析软件分析,数据以x±s表示。多组间比较采用单因素方差分析(one-wayANOVA);两两比较时方差齐时采用LSD检验,方差不齐时采用Dunnett’s T3检验。P<0.05为差异有统计学意义。结果:1.在多聚左旋精氨酸作用下,IL-6、IL-8、Eotaxin的表达水平明显增高,且在多聚左旋精氨酸为5μg/ml时,IL-6、IL8的表达水平最高;在多聚左旋精氨酸为20μg/ml时,Eotaxin的表达水平最高;但各浓度之间的差异无统计学意义;而单独LPS组、多聚左旋精氨酸组与对照组比较,IL-6、IL-8、Eotaxin的水平差异无统计学意义(P>0.05)。2.在多聚左旋精氨酸作用下,IL-13的表达未见明显改变;各组IL-13的水平差异无统计学意义(P>0.05)。3.将多聚左旋精氨酸、LPS及肝素共同作用NCI-H292细胞时,IL-6、IL-8、Eotaxin的表达水平明显低于LPS+poly-L-arginine组(P<0.05)。4.将多聚左旋精氨酸、LPS及L-NMMA共同作用NCI-H292细胞时,L-NMMA对各组IL-6、IL-8的表达无影响(P>0.05)。结论:1.多聚左旋精氨酸能够促进LPS诱导的NCI-H292细胞IL-6、IL-8、Eotaxin的表达水平,但对IL-13的表达水平没有影响。2.肝素能够抑制多聚左旋精氨酸联合LPS诱导的NCI-H292细胞IL-6、IL-8的表达水平,而L-NMMA对IL-6、IL-8的表达水平没有影响。
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