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本实验是研究羊栖菜硒多糖对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及凋亡作用,并探讨了其作用途径和作用机制。MTT实验结果显示羊栖菜硒多糖对人乳腺癌MCF-7细胞有一定的抑制作用,抑制作用随着羊栖菜硒多糖浓度的增加而增强,其对人乳腺癌MCF-7细胞的IC50值为7.94μg/ml。采用倒置显微镜观察,羊栖菜硒多糖直接作用于人乳腺癌MCF-7细胞48h后,阴性组细胞贴壁完好,轮廓清晰,没有破裂,起皱。给药组随着给药浓度的增加,细胞生长密度逐渐变疏,表面起皱,细胞逐渐变圆,高浓度组大部分细胞破碎,细胞形态不完整,贴壁减少。说明当羊栖菜硒多糖作用于人乳腺癌MCF-7细胞,MCF-7细胞出现凋亡现象,并呈剂量依赖性。荧光显微镜下观察,经过Hoechst33258染色,正常细胞的细胞核被染成大小均匀的蓝色,细胞排列紧密,数量多,无破损,无凋亡小体出现;凋亡细胞的核固缩变形且呈致密强荧光,细胞间隙很大,细胞破碎,出现凋亡小体;实验结果表明,羊栖菜硒多糖作用于人乳腺癌MCF-7细胞48h后,阴性对照组结果显示人乳腺癌MCF-7细胞染色质均匀,核形态规则,中剂量给药组细胞核出现碎片,高剂量给药组细胞核则呈致密浓染,这表明羊栖菜硒多糖可导致人乳腺癌MCF-7细胞形态学发生改变,并随着剂量增加出现细胞凋亡现象。通过流式细胞仪检测分析,利用PI(碘化丙啶)染色,实验结果表明,不同浓度的羊栖菜硒多糖作用于人乳腺癌MCF-7细胞48 h后,有明显凋亡峰出现,各组细胞凋亡率分别是(2.85±0.08)%,(24.36±3.89)%,(31.58±2.72)%,凋亡率随着给药量的增加而升高,进一步说明羊栖菜硒多糖对人乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用与诱导肿瘤细胞凋亡有关。在以上实验的基础上,本实验还考察了羊栖菜硒多糖诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的途径。采用激光共聚焦显微镜检测人乳腺癌MCF-7细胞线粒体膜电位的变化,不同浓度羊栖菜硒多糖作用于人乳腺癌MCF-7细胞48h后,线粒体膜电位荧光强度分别:低剂量 44.09±0.14、中剂量 25.64±0.25、高剂量 3.82±0.09。采用激光共聚焦显微镜检测人乳腺癌MCF-7细胞中钙离子含量的变化,不同浓度羊栖菜硒多糖作用于人乳腺癌MCF-7细胞48h后,钙离子的荧光强度分别为:低剂量8.36±0.41、中剂量 11.86±0.13、高剂量 34.13±0.94。采用激光共聚焦显微镜检测人乳腺癌MCF-7细胞中活性氧含量的变化,不同浓度羊栖菜硒多糖作用于人乳腺癌MCF-7细胞48h后,活性氧荧光强度分别为:低剂量34.30±0.34、中剂量 61.60±0.72、高剂量 154.36±3.72。以上结果表明,羊栖菜硒多糖可以通过线粒体途径诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡:羊栖菜硒多糖作用到细胞后,随着给药量增加线粒体膜被破坏,线粒体膜的通透性增加,使线粒体膜电位降低,活性氧含量升高,钙离子浓度升高,从而导致线粒体膜通道孔过度开放,最后诱导细胞凋亡。综上所述,本论文通过体外实验证明了羊栖菜硒多糖可以诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡,并且线粒体途径是羊栖菜硒多糖诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的可能途径之一。