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猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)在猫群中广泛存在,通常引起猫上呼吸道疾病和口腔溃疡,偶尔引起猫发热、跛行或亚临床症状,常与猫疱疹病毒I型(Feline Herpesvirus 1,FHV-1)混合感染。近年来出现的高毒力毒株能引起猫水肿、溃疡性皮肤病变、黄疸和高死亡率,严重威胁猫群健康。FCV为RNA病毒,具有高度的遗传多样性,这在疫苗免疫失败中起着关键作用,也是高毒力毒株出现的基础。病毒和宿主的相互作用可以导致宿主的基因关闭,病毒通过关闭宿主基因表达调控病毒自身转录丰度,从而逃避宿主免疫监控。FCV感染是否能够导致宿主基因关闭,FCV非结构蛋白是如何阻断宿主基因表达的,探究其关闭宿主基因表达的机制,可以更好理解FCV致病机制,为猫杯状病毒感染的防控提供理论基础。FCV 2280是一株中等毒力的毒株,为了确定FCV 2280感染后是否能导致宿主基因表达关闭,首先通过同位素实验方法,分析FCV感染后宿主蛋白合成情况。结果显示,在感染早期,FCV感染减少了宿主蛋白的产生,但增加了病毒蛋白的合成。结果表明,FCV感染能引起宿主基因关闭,影响宿主蛋白的合成。通过PCR法制备生物素标记的GFP和GAPDH DNA探针,建立了Northern blot方法;利用该方法检测FCV 2280感染后是否通过下调宿主基因mRNA表达进而关闭宿主基因表达。进一步通过该方法分析FCV 2280感染后是否通过降解宿主mRNA抑制基因表达。结果显示FCV感染后能下调宿主内源基因GAPDH和外源基因GFP mRNA丰度,进一步证明FCV通过降解宿主mRNA抑制基因表达。其次通过Northern blot检测方法,筛选了FCV引起宿主基因关闭的主要病毒因子,并对其关闭宿主基因的调控机制进行了研究。结果表明,蛋白酶-聚合酶(Proteinase-Polymerase,PP)为FCV引起宿主基因关闭的主要病毒因子,进一步鉴定了PP蛋白引起宿主基因关闭的关键活性位点;PP主要靶向Pol II型RNA,能够通过诱导RNA降解的方式下调宿主外源和内源基因mRNA表达量,并以不依赖核糖体的方式靶向宿主mRNA,经过初级切割后,最后通过宿主外切核酸酶Xrn1完成宿主mRNA的降解。为了检测PP蛋白是否与其他引起宿主基因关闭的病毒因子一样能表现出RNase活性,纯化了GST-PP融合蛋白及其突变体PP H39A,将等量的底物RNA与GST-PP融合蛋白、突变体GST-PP H39A或GST孵育后进行降解反应。结果显示,单独与GST蛋白混合孵育的RNA底物在整个孵育时间内保持稳定,而与GST-PP融合蛋白混合孵育的底物RNA被切割成了小片段;在细胞试验中,PP H39A的突变抑制了其降解RNA活性,结果显示突变体蛋白未影响RNA稳定性。上述结果表明,PP具有RNase活性,通过切割宿主mRNA的方式引起宿主的基因关闭。本研究发现FCV通过降解宿主mRNA关闭宿主基因的表达;筛选出PP为FCV引起宿主基因关闭的主要病毒蛋白,鉴定了PP蛋白引起宿主基因关闭的关键活性位点;PP作用的RNA类型为由RNA聚合酶II转录的mRNA,并以不依赖核糖体的方式结合到mRNA上,最后通过宿主外切核酸酶Xrn1完成宿主mRNA的降解;PP具有RNase的活性,并通过切割宿主mRNA的方式引起宿主基因关闭。