目的铍是一种稀有战略金属,毒性强,能对人体造成多种危害,尤其是肺纤维化肺纤维化是一种进行性且不可逆的疾病,发病机制尚不明确且无特异性疗法。miRNA是一种小分子RNA,被发现在肺纤维化中表达异常。本研究中,我们通过miR-21干扰慢病毒抑制miR-21的表达,来探讨miR-21在Be SO4诱导的A549细胞纤维化中的作用机制,为治疗铍致肺纤维化提供新思路。方法1、采用CCK-8法检测Be SO4染毒不同浓度、不同时间对存活率的影响,并于倒置显微镜下观察Be SO4对A549细胞形态的影响。确定后续实验染毒浓度与染毒时间。2、采用蛋白免疫印迹（Western blot）检测各组转化生长因子-β1（TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原（COL-Ⅰ）和Ⅲ型胶原蛋白（COL-Ⅲ）相对表达水平。3、使用在线数据库miRbase预测miR-21与Smad7的3’UTR区域存在结合位点,并构建Smad7野生型和突变型载体,使用双荧光素酶报告基因实验验证miR-21与Smad7的靶向关系。4、用miR-21干扰慢病毒转染A549细胞构建miR-21干扰稳定细胞系。5、采用实时荧光定量PCR检测转染慢病毒后各组各组miR-21表达水平。6、采用蛋白免疫印迹检测转染慢病毒后各组Smad7、Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3、α-SMA、TGF-β1、COL-Ⅰ和COL-Ⅲ的蛋白相对表达水平。7、采用免疫荧光实验检测转染慢病毒后各组P-Smad2、P-Smad3在细胞中的表达情况。结果随着Be SO4浓度增加,A549细胞活力呈下降趋势（P均＜0.05）,Be SO4刺激A549细胞后,细胞形态发生改变,呈长纤维状。确定Be SO4的染毒浓度为1、10、100μmol·L-1（溶剂为完全培养基,设为低、中、高剂量组）为实验浓度,染毒时间为48 h。不同剂量Be SO4处理A549细胞48 h后细胞中α-SMA、TGF-β1、COL-Ⅰ和COL-Ⅲ的蛋白相对表达量均呈升高趋势。与对照组相比,低、中、高剂量组α-SMA、TGF-β1、COL-Ⅰ和COL-Ⅲ的蛋白相对表达量均明显升高。在线数据库miRbase预测miR-21与Smad7的3’UTR区域存在结合位点,双荧光素酶报告基因实验结果显示miR-21靶基因为Smad7。miR-21干扰A549细胞系构建成功。实时荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,模型组miR-21基因相对表达量明显升高（P＜0.05）。与干扰对照组相比,miR-21干扰组miR-21基因表达水平明显降低（P＜0.05）。蛋白免疫印迹结果显示,与对照组相比,模型组Smad7蛋白相对表达水平明显下降（P＜0.05）,Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3、TGF-β1、α-SMA、COL-Ⅰ和COL-Ⅲ的蛋白相对表达水平均明显升高（P＜0.05）。与干扰对照组相比,miR-21干扰组Smad7蛋白相对表达水平明显升高（P＜0.05）,Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3、Smad7、TGF-β1、α-SMA、COL-Ⅰ和COL-Ⅲ的蛋白相对表达量降低（P＜0.05）。模型组与干扰对照组的各基因蛋白表达水平差异无统计学意义。免疫荧光结果显示,与对照组相比,模型组P-Smad2、P-Smad3的蛋白相对表达水平在细胞核和细胞质中均明显升高。与干扰对照组相比,miR-21干扰组P-Smad2、P-Smad3的蛋白相对表达水平在细胞核和细胞质中均明显降低,而模型组和干扰对照组P-Smad2、P-Smad3的蛋白相对表达水平无明显差异。结论1、双荧光素酶报告基因实验结果显示miR-21靶基因为Smad7。2、抑制miR-21表达后可能是通过促进Smad7的表达来改善铍及其化合物致肺纤维化。