辣椒烟草花叶病毒的分子鉴定及检测技术研究

来源 :贵州师范大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:wffgwffg
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
辣椒系茄科辣椒属一年或有限多年生草本植物,其营养价值极高,堪称“蔬菜之冠”。作为辣椒产销大省,贵州辣椒常年栽培面积500万亩左右,约占中国的20%,产值150亿左右,其经济对辣椒产业的依赖程度有上升之势。然而,近年来随着辣椒种质的交流,病毒随之扩散,并产生越来越严重的危害,造成极大的经济损失。因此,对辣椒病毒病的早期诊断并采取一定的防范措施对减少经济损失具有重要意义。烟草花叶病毒(Tobacco Mosaic Virus,TMV)隶属于烟草花叶属(Tobamovirus),为(+)ssRNA病毒,主要通过汁液传播,病健叶轻微摩擦造成微伤口,病毒即可侵入,对辣椒的危害日益扩大。对植物病毒分离物进行分子鉴定并研究开发出快速灵敏的检测方法对病毒病的早期预防具有重要的理论及实践意义。本研究对采自贵州的辣椒病样进行了ELISA检测,对TMV贵州辣椒分离物(TMV-GZ)进行了分子鉴定,建立了同步检测TMV、PMMoV和CMV三种辣椒重要病毒的多重RT-PCR方法和检测TMV的核酸斑点杂交方法,同时,建立并优化了TMV外壳蛋白(CP)基因的原核表达体系,以期为TMV抗血清的制备及免疫学检测方法的建立奠定基础。本研究获得的主要结论如下:1.成功克隆了TMV-GZ分离物全长CP基因序列,该基因长为480 bp,编码18 kDa的CP蛋白。TMV-GZ分离物CP基因序列与同属异种病毒的同源性仅为32%-65%,序列差异明显;相反,它与11个TMV病毒分离物的同源性在98%-99%之间;TMV及其它病毒分离物聚类形成3个明显分支,TMV-GZ与其他11个TMV分离物亲缘关系较近,而与同属其他3种病毒之间的进化距离较远,证实该分离物确为TMV。2.根据烟草花叶病毒(TMV)、辣椒轻斑驳病毒(PMMoV)和黄瓜花叶病毒(CMV)的外壳蛋白(CP)编码序列设计了3对PCR检测引物,通过条件优化建立了同步检测以上3种辣椒病毒的多重RT-PCR方法。该多重RT-PCR体系不对ORSV、PVX和PVY等同属或不同属的其它病毒发生反应,特异性好;可检测到104×稀释的病毒cDNA模板,具有较高的灵敏度,可用于PMMoV、TMV和CMV 3种辣椒病毒的同步检测。3.基于TMV的CP序列,采用随机引物法制备了地高辛标记的TMV双链cDNA杂交探针(DIG-TMV CP),并初步建立了快速检测TMV的核酸斑点杂交(NASH)方法,该法具有较好的特异性和灵敏度(可检测到625×稀释的病毒RNA)。4.构建了TMV CP基因的原核表达载体pET32a_TMV CP。该CP基因以融合蛋白的形式获得了可溶性高效表达。优化后的原核表达条件为:0.8 mM IPTG诱导、25℃、200 rpm和9h。以重组的融合CP蛋白免疫小白鼠制备了TMV抗血清。
其他文献
贵金属纳米有序阵列因其特殊的光学性能在纳米光电子器件、传感器等领域具有潜在的应用前景,已成为当前研究的前沿领域之一。其中,如何实现形貌、尺寸可控的纳米有序阵列的制备是一挑战性难题。嵌段共聚物不同链段之间的热力学不相容使其发生微相分离自组装形成尺寸为5~100 nm的周期性纳米结构,可作为模板。本论文选择两嵌段共聚物聚苯乙烯-b-聚(4-乙烯基)吡啶(PS-b-P4VP),采用溶剂退火技术,制得有序
  除少数编制专项规划的区域外,城市支路以下级别道路及步行道在现行城市规划编制中缺乏有效的控制及具体实施方法,城市慢行系统因此效率低下,而城市道路系统也面临着日益严峻
会议
  发展大型居住社区是满足城市空间拓展的需要,有利于形成"多中心"的城市发展格局。保障中低收入群体的安居乐业,是社会公益事业和社会保障体系的重要组成部分,而大型居住社区
机体发育不同阶段造血部位是不一样的,出生之前主要在胎盘和肝脏,出生后主要在骨髓.因此造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)有一个迁移的过程:从胎盘转到胎肝最后到骨
  受国内外经济社会发展及其各种自然与社会环境的影响,尽管国家出台的系列水库移民后扶政策实施成效显著,但伴随社会活动中的多种类型复杂因素动态变化,目前水库移民"两区"依
城市规划是对一定时期内城市的经济和社会发展、土地利用、空间布局以及各项建设的综合部署、具体安排和实施管理,具有策略制订、规划设计、政府行为和社会活动等基本属性和
拿什么来直面残酷滕之先在反复阅读《伟大的悲剧》,进而阅读《夺取南极的斗争》《人类的群星闪耀时》之后,我有这样一个思考在心中激荡:当残酷的命运不可逆转地到来,人们拿什
纳米晶体材料不同于他们的大块体材料,由于其小尺寸效应、表面效应、量子尺寸效应和宏观隧道效应,表现出奇异的力学、电学、磁学、热学和光学的特性,使其在生产和高科技领域有着
  《城乡规划法》建立了新的城乡规划体系以统筹城乡发展,而这样的体系亦存在规划管理上的漏洞。本文首先从法律视角分析了"规划区"的定义与内涵,认为"规划区"是法律授予城乡
会议
  城市设计涉及城市用地、景观、建筑等多方面内容,而从管理来看,则可以说是对控制性详细规划的三维补充。近年来,城市设计作为一种规划类型得到了广泛的认可,全国各类城市开展
会议