利用CRISPR/Cas9和Cre/Lox系统编辑疱疹病毒用于肿瘤的诊断和治疗

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sjzafei
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
肿瘤的发生与发展对人类和宠物的健康构成巨大威胁。经改造后的溶瘤病毒可利用其自身特异性靶向肿瘤细胞的特点,在肿瘤细胞中大量复制,裂解后的肿瘤细胞和复制的病毒被机体免疫系统识别激活免疫反应,从而破坏肿瘤微环境,达到清除剩余的肿瘤细胞的目的。溶瘤病毒疗法联合放疗、化疗等治疗方法能进一步提高肿瘤的治疗效果。溶瘤病毒在人类肿瘤的临床治疗已有一定的运用,但利用溶瘤病毒治疗宠物肿瘤研究仍方兴未艾,改造病毒用于肿瘤检测也鲜有报道。本课题旨在利用CRISPR/Cas9和Cre/Lox基因编辑系统同时敲除伪狂犬病毒(PRV)和Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)的多个毒力和复制相关基因,分别用于肿瘤的治疗及检测。与传统的单个基因逐步敲除的基因重组缺失技术相比,基于CRISPR/Cas9和Cre/Lox基因编辑系统既减少工作量又缩短纯化时间,更加高效、便捷。本论文一共分为两部分,第一部分为PRV病毒TK和gE基因双敲除,用于肿瘤的治疗。其主要结果概括如下:1.利用CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除gE和TK两个基因,并分别插入绿色荧光蛋白(GFP)和红色荧光蛋白(mCherry)。联合使用低熔点琼脂糖噬斑、梯度稀释及流式分选等方法进行纯化,成功获得PRV-WT-ΔTK-mCherry-ΔgE-GFP重组毒。2.利用Cre/Lox重组系统将重组病毒中的荧光基因敲除,通过低熔点琼脂糖噬斑纯化,成功获得PRV-WT-ΔTK-ΔgE双基因缺失毒。3.使用不同剂量的PRV-WT-ΔTK-ΔgE双基因缺失毒治疗骨髓瘤模型,结果显示PRV双基因缺失毒可延长骨髓瘤模型小鼠的存活时间。第二部分研究内容为敲除HSV-1双拷贝的神经毒力基因γ34.5,使得该病毒只能在肿瘤来源的细胞中复制,同时利用肿瘤特异性启动子(hTERT)全长或其核心区(hTERT hexin)表达标签蛋白(HaloTag)、膜蛋白(TM)及荧光蛋白(mCherry),直接通过观察荧光来确定样品中有无肿瘤细胞,以期达到肿瘤细胞早期检测的目的。主要结果概括如下:1.利用CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除HSV-1病毒γ34.5基因,并利用同源重组修复机制成功将带有红色荧光蛋白(mCherry)的同源重组片段插入HSV-1病毒基因组中。2.利用低熔点琼脂糖噬斑成功纯化获得四株HSV-1荧光蛋白重组毒。其中重组毒HSV-1-hTERT-TM-HaloTag-mCherry-polyA和HSV-1-hTERT(hexin)-TM-HaloTag-mCherry-polyA可初步用于肿瘤的早期检测。综上所述,本研究利用CRISPR/Cas9和Cre/Lox基因编辑系统成功改造PRV和HSV-1两种病毒,获得PRV-WT-ΔTK-ΔgE双基因缺失毒和HSV-1荧光蛋白重组毒,为肿瘤早期检测和治疗提供重组病毒工具和一定的理论基础。
其他文献
“交互”是音乐科技领域中一个出现频率极高的词汇,甚至可以说,在电子音乐领域,无电子不交互:电子乐器、电子音乐控制器、电子音乐交互装置等电子音乐设备,无不依靠交互动作以获取和发送必要的控制信息。在当今层出不穷的交互式电子音乐作品中,随处可见新型的交互式电子乐器,它们或简易,或繁复,但都为这个世界增添了新的声音。因此交互式电子乐器的设计和研发成为了越来越多业内人士的研究对象。得益于电子领域科学技术的迅
简要介绍了各种柴油低温流动改进剂的类型。依据柴油低温流动改进剂的结构特点以及与结晶蜡作用方式的不同,对柴油低温流动改进剂进行了重新分类和总结,并分别阐述其在柴油中
<正> 杨群,1959年5月生,江苏海门人。1981年毕业于北京大学地质地理系。1988年于美国德克萨斯大学(达拉斯)获理学博士学位。1989年回国,在中科院南京地质古生物研究所从事微
<正>"民以食为先,食以安为先"。食品药品安全已成为人民群众的强烈愿望、成为政府保障和改善民生的重要任务,同时,食品药品安全工作也是对我党执政能力的重大考验。今年5月习
<正> 福建省梅花山位于武夷山脉南段与博平岭之间,是玳瑁山的一部分.属于中低山貌,平均海拔约900米,最高峰石门山海拔1811米,是闽西山区最高点。梅花山属于中亚热带风气候带,
介绍了通过邻二甲苯工艺路线生产苯酐的几种技术,包括传统的单固定床氧化反应器、开发的双固定床反应器、用马来酸酐作为液体低共熔混合物回收苯酐和基于改善的耐磨催化剂的
互联网(Internet)的快速发展为信息技术与应用扩展了更为广阔的空间,同时也为传统的软件开发理论、方法和技术带来了一系列的挑战.回顾了现有基于网络的新型计算范型和应用模
幼儿园课程游戏化是将游戏理念、游戏精神渗透到课程实施的各类活动之中。它的最终目的是让幼儿园课程更加适合幼儿,让幼儿园的课程更有趣、丰富。我们以“环保服装DIY”为课
随着汽车保有量逐年扩大,车道偏离导致的交通事故数量和占比连年增高,对车道偏离辅助系统的研究也受到越来越多的关注。本文对车道偏离辅助系统的决策方法和横向控制方法进行
<正> 科技统计是观察一个国家和地区的科学技术能力与发展水平,制定科学技术政策,编制和检查科学技术长远规划、年度计划,对科学技术的发展实行科学管理的工具。目前我国关于