目的：构建结核分枝杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3原核表达载体，获得Hsp16.3蛋白，并应用生物信息学技术对结核分枝杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3进行分析，获取该基因的相关信息。　　方法：以结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA为模板，应用PCR方法扩增Hsp16.3基因，以PET28a质粒为载体，构建重组质粒PET28a-Hsp16.3，测序正确后，转入宿主菌BL21（DE3）进行诱导表达。表达的融合蛋白经SDS-PAGE，WesternBlot分析鉴定，并通过镍柱进行亲和层析纯化，表达蛋白分子质量约17kD能被结核杆菌16kD单克隆抗体和小鼠抗HisTag单克隆抗体识别。利用Pmtparam，Protseale，HMMTOP，TMHMM，GOR4，ProtFun等软件，进行生物信息学分析结核分枝杆菌小分子热休克蛋白16.3的氨基酸组成、理论等电点、结构域、疏水性、跨膜区、糖基化位点、磷酸化位点及二级结构等。　　结果：成功构建了Hsp16.3原核表达载体PET28a-Hsp16.3，并在宿主菌BL21（DE3）中表达。生物信息学分析结核分枝杆菌小分子热休克蛋白16.3白分子式为：C716H1131N197O225S4，分子量为16227.2，理论等电点为5.00。该蛋白氨基酸序列中含有α-螺旋(Alphahelix)46处，延伸链(Extendedstrand)25处，无规则卷曲(Randomcoil)73处及5个磷酸化位点；4个O-糖基化位点；1个前肽裂解预测位点；该蛋白是一个亲水性不稳定蛋白，无跨膜区，可能参与重要的能量代谢及免疫反应。　　结论：1.Hsp16.3基因克隆入宿主菌中并成功表达。　　2.经过纯化得到纯度较高的目的蛋白，为Hsp16.3的进一步研究奠定基础。　　3.生物信息学分析显示该蛋白是一个亲水性不稳定蛋白，无跨膜区，可能参与重要的能量代谢及免疫反应。