【摘 要】
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拟除虫菊酯是一种人工合成的仿生类化合物,在农牧业防治及家庭日常除虫中广泛使用。溴氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、氯氰菊酯和联苯菊酯等是市场上较为常见的菊酯类农药。近年来,溴氰菊酯是其中用量增长最快、毒性最高的一种,许多中华绒螯蟹养殖户用溴氰菊酯来清除野杂鱼和有害生物,甚至用来清塘,从而影响到其生长和品质。微生物修复作为生物修复中的主要方式,对农药残留的降解起着举足轻重的作用。因此研究溴氰菊酯对中华绒螯蟹的
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拟除虫菊酯是一种人工合成的仿生类化合物,在农牧业防治及家庭日常除虫中广泛使用。溴氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、氯氰菊酯和联苯菊酯等是市场上较为常见的菊酯类农药。近年来,溴氰菊酯是其中用量增长最快、毒性最高的一种,许多中华绒螯蟹养殖户用溴氰菊酯来清除野杂鱼和有害生物,甚至用来清塘,从而影响到其生长和品质。微生物修复作为生物修复中的主要方式,对农药残留的降解起着举足轻重的作用。因此研究溴氰菊酯对中华绒螯蟹的毒性影响,发现有效的降解菌具有重要意义。本文以溴氰菊酯为主体,探究溴氰菊酯对中华绒螯蟹的毒性效应,从养殖池塘底泥中分离筛选出一株高效降解菌P-2,并验证P-2在养殖中的降解效率,具体结果如下:(1)从形态学和免疫学两大方面研究了中华绒螯蟹对溴氰菊酯农药的敏感性。实验采用24 h换水式毒性试验方法,测出该农药对中华绒螯蟹的24 h-LC50、48 h-LC50、96 h-LC50分别是6.5、5.0、2.75μg/L,安全浓度为1.2μg/L。再选取96 h-LC50的1/2、1/5、1/10的浓度为实验组,即1.37、0.55和0.28μg/L,分别在溴氰菊酯胁迫的第1、3、6、10、15天测定中华绒螯蟹肝胰腺的SOD、CAT、MDA、PO的酶活性和基因表达的变化,除MDA含量外,其他酶活和基因表达总体呈现出先上升再降低的趋势,在胁迫的第6-10天各指标达到最大值,随后恢复正常;MDA的含量随胁迫时间增加累积,浓度越高,累积量越大。通过组织切片HE染色结果分析可知,受到溴氰菊酯胁迫15天后,不同胁迫组中华绒螯蟹肝胰腺受到了不同程度的损伤,B细胞数量骤减,出现大量空泡,基膜与上皮细胞分离,管腔内出现絮状物。结果表明,中华绒螯蟹对溴氰菊酯类农药敏感性高,随胁迫时间增加,机体非特异性防御系统受到损伤,肝胰腺细胞被破坏。(2)从使用溴氰菊酯清塘的中华绒螯蟹养殖池塘底泥中,分离筛选出一株降解溴氰菊酯的候选细菌P-2,通过形态学观察、生理生化鉴定、16S r DNA基因序列分析,认为该菌株属于副球菌属(Paracoccus sp.)。(3)对该副球菌的降解特性进行了分析,通过控制单因素变量的方法研究了菌株的降解特性,确定不同接种量、p H值、农药初始浓度对菌株降解能力的影响。结果表明接p H为7、底物浓度小、接种量大时,菌株降解效果佳。本实验采用副球菌P-2降解100 mg/L的溴氰菊酯,5 d内降解效率最高可以达到86.6%。(4)在实验室养殖条件下,验证了菌株P-2对溴氰菊酯的降解效果。在中华绒螯蟹的养殖水体中,加入溴氰菊酯农药使其初始浓度达到3.0μg/L,再加入分离出的降解菌P-2,使水体中菌液浓度为6.0×10~8CFU/L。结果表明,在加入降解菌株的实验组中,中华绒螯蟹肝胰腺和肌肉组织中溴氰菊酯残留量都显著降低。其降解率在肝胰腺中可达80%,肌肉中可达72%。目前我国对拟除虫菊酯农药在水产品中的残留量的规定尚不完善,只规定了溴氰菊酯在鱼肉中最高残留为0.03 mg/L,加入P-2菌株后,河蟹可食用部分残留量远低于以上标准。证明菌株P-2能有效降低溴氰菊酯在中华绒螯蟹体内的残留。
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