健脾化湿法治疗儿童特应性皮炎疗效观察及对小鼠AQP3表达的影响

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研究背景:特应性皮炎(AD)是一种慢性、复发性、变态反应性皮肤病,属于中医文献中的“奶癣”、“四弯风”、“湿疮”、“浸淫疮”等范畴。脾虚湿困是其主要病机。诸多医家采用健脾化湿法治疗AD取得了良好的临床疗效,已报导的作用机理主要包括抗炎及免疫调节方面。水通道蛋白(AQPs)在机体的多个组织器官表达,在维持体内水平衡过程中起重要作用。目前诸多研究已证明水通道蛋白与水液代谢障碍性疾病有密切关系,与中医津液代谢理论相关。深入研究水通道蛋白的作用,将有可能解释水、湿等病理变化的机理,并在此基础上阐明化湿、渗湿、燥湿药的药理作用。已有研究表明水通道蛋白3(AQP3)与AD发病相关。健脾化湿法是否能够通过调节皮肤AQP3来发挥治疗作用还存在许多空白。本研究运用健脾化湿法治疗AD小鼠,运用现代分子生物学研究技术观察健脾化湿法对AD小鼠皮肤AQP3表达的影响,旨在探讨健脾化湿法治疗AD的部分作用机制与途径,为进一步探明健脾化湿法治疗AD的分子生物学机制奠定基础。研究目的:1、初步探讨导师小儿健脾化湿方治疗AD患儿的疗效,为指导临床治疗提供依据。2、通过观察健脾化湿法对AD小鼠AQP3表达的影响,初步探讨健脾化湿法治疗AD的部分作用机制与途径,为进一步阐明健脾化湿法治疗AD分子生物学机制奠定基础。研究方法:1、本研究选择50例脾虚湿蕴型AD患儿为研究对象,治疗前及治疗后4周时分别记录SCORAD积分的改善。治疗前及治疗4周后检测血清总IgE和EOS计数。2、采用免疫组织化学法检测AD小鼠皮肤组织AQP3的表达变化。3、应用荧光定量PCR法、Western blot法检测小儿健脾化湿方对AD小鼠皮肤组织AQP3mRNA及蛋白的影响。研究结果:1、25例AD患儿经小儿健脾化湿方治疗4周后SCORAD积分下降明显,有显著性差异(P<0.01),说明健脾化湿法治疗儿童AD疗效确切。2、血清总IgE的测定:治疗组治疗前血清总IgE较健康对照组显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);治疗后治疗组血清总IgE较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.01)。对照组治疗前血清总IgE较健康对照组显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);治疗后对照组血清总IgE与治疗前比较无明显差异(P>0.05)。3、嗜酸性粒细胞测定:治疗组治疗前EOS较健康对照组显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);治疗后治疗组EOS较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.01)。对照组治疗前EOS较健康对照组显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);治疗后对照组EOS与治疗前比较无明显差异(P>0.05)。4、免疫组织化学法检测发现,AD小鼠皮肤AQP3平均光密度值升高,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。中药模型组小鼠皮肤组织AQP3平均光密度较空白模型组降低,其间差异有统计学意义(P<0.01)。5、Western blot检测结果显示空白模型组小鼠皮肤组织中AQP3蛋白较空白对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。中药模型组较空白模型组显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。荧光免疫PCR检测显示空白模型组小鼠皮肤组织中AQP3mRNA表达较空白对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。中药模型组AQP3mRNA较空白模型组降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:1、小儿健脾化湿方治疗AD患儿临床症状改善明显,SCORAD积分显著降低,差异有统计学意义。说明健脾化湿法治疗儿童AD疗效确切。并且在治疗期间没有观察到明显的副反应,初步证实本法治疗AD安全有效,值得推广。2、本研究显示AD患者血清总IgE、EOS水平明显升高,治疗后血清总IgE、EOS水平明显降低,差异有统计学意义,说明此二者均参与了AD的发病,可作为反映AD患者病情严重程度的血清学指标之一。3、AD模型鼠皮肤组织AQP3蛋白及AQP3mRNA表达显著升高,经小儿健脾化湿方治疗后皮肤组织AQP3表达降低,说明健脾化湿法治疗可以明显改善皮肤组织中AQP3蛋白及AQP3mRNA的表达,促进皮肤的修复。
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