目的:探讨体外培养人眼小梁细胞(HTCs)的方法并观测其生物学特性。在此基础上研究肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)是否能够参与调节体外培养的HTCs表达粘附分子CD44s及其意义。方法:(1).采用组织块培养方法进行体外HTCs的培养,运用二甲基噻唑二苯基四唑溴盐( [3-(4,5-dimethylthiazol2-yl)-2,5-diphenyl tetrazoliumbromide],MTT)比色法、倒置显微镜、透射电镜,免疫组织细胞化学等方法观察体外培养细胞的生物学特性并进行鉴定。(2).利用流式细胞术方法定量检测体外培养的HTCs经0.0ng/ml(对照组,control组)、5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml TNF-α处理24小时(h)后,细胞表达CD44s蛋白量。(3).利用RT-PCR(reverse transcriptionpolymerase chain reaction)方法半定量检测体外培养的HTCs经0.0ng/ml(对照组,control组)、5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml TNF-α处理24h后,小梁细胞CD44smRNA表达量的变化。(4).利用MTT比色法检测体外培养的HTCs经0.0ng/ml(对照组,control组)、5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml TNF-α处理24h后,各细胞组的光吸收值(OD值)。结果:(1).组织块培养10 -15天(d)后可见细胞从其边缘向外生长,倒置显微镜下成梭形、圆形、椭圆形、并有多个突起,电镜可见HTCs表面有较多微绒毛,细胞间缝隙连接,胞质内见有很多次级溶酶体。(2).免疫组织细胞化学检测纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)、层粘连蛋白(laminin,LN)和神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)染色阳性,传3代细胞均表现为胞浆内棕黄色着色。(3).利用流式细胞术方法检测5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml的TNF-α处理组细胞其平均荧光强度分别为76.79±9.00、89.89±14.64、91.65±14.96,其中10ng/ml、20ng/ml的TNF-α处理组平均荧光强度与对照组(control组)73.93±12.39比较,差异具有统计学意义。(4).利用RT-PCR法检测5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml的TNF-α