目的:从喉癌Hep-2细胞系中分离、培养和鉴定CD44~+CD133~+喉癌干细胞,观察其体外生物学特性。研究喉癌Hep-2细胞中CD44~+CD133~+表型干细胞的增殖生长能力,侵袭转移能力,粘附能力,克隆形成能力以及耐药性等一系列干细胞特性,对喉癌干细胞理论和可能的靶向治疗方法做一些新的探讨。方法:使用含有10%FBS的DMEM完全培养液体外培养Hep-2喉癌细胞,应用免疫磁珠分选技术分选CD44~+CD133~+、CD44~+CD133~-、CD44~-CD133~+、CD44~-CD133~-四种亚群,使用CCK-8试剂盒对未分选的Hep-2细胞及四种亚型测定增殖能力,对5种细胞绘制生长曲线,应用流式细胞仪检测分选阳性率,应用Transwell小室进行侵袭实验和黏附实验评价其侵袭能力和黏附能力,克隆形成实验评价其单细胞分化潜能,顺铂作用下检测其耐药性。结果:1.流式细胞仪检测分选后各细胞的表达率,CD44~+CD133~+亚群、CD44~+CD133~-亚群、CD44~-CD133~+亚群、CD44~-CD133~-亚群4种细胞的表达率分别为89.62%,4.04%,5.16%,1.18%。2.对Hep-2、CD44~+CD133~+亚群、CD44~+CD133~-亚群、CD44~-CD133~+亚群、CD44~-CD133~-亚群5种细胞进行生物学特性研究,CD44~+CD133~+细胞亚群的增殖,侵袭,黏附,克隆形成及耐药性均增强,CD44~+CD133~+>CD44~-CD133~+>Hep2>CD44~+CD133~->CD44~-CD133~-。结论:免疫磁珠技术是分选CD44~+CD133~+的有效方法,CD44~+CD133~+细胞亚群具有明显的肿瘤干细胞特征,CD44~+是喉癌干细胞维持干性的重要因素,可以利用CD44~+CD133~+作为喉癌的分子靶向标志,对喉癌以及头颈鳞癌的靶向治疗提供新的方法和可能。