【摘 要】
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目的:人脂肪干细胞（human adipose-derived stem cells,hADSCs）具有容易获取、增殖能力强等优点,是实现牙槽骨缺损再生的理想种子细胞。富血小板血浆（platelet-rich plasma,PRP）,富含生长因子,能够促进组织修复。本研究的目的是观察PRP能否促进hADSCs成骨分化,并进行高通量测序,探索其中可能的机制。方法:1、制备PRP,流式细胞仪鉴定hAD
【基金项目】
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辽宁省重点研发项目（2020JH2/10300069）自体脂肪细胞在正畸患者牙槽骨缺失再生修复中的作用研究,2020.05.1-2022.04.30；
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目的:人脂肪干细胞（human adipose-derived stem cells,hADSCs）具有容易获取、增殖能力强等优点,是实现牙槽骨缺损再生的理想种子细胞。富血小板血浆（platelet-rich plasma,PRP）,富含生长因子,能够促进组织修复。本研究的目的是观察PRP能否促进hADSCs成骨分化,并进行高通量测序,探索其中可能的机制。方法:1、制备PRP,流式细胞仪鉴定hADSCs的免疫表型,鉴定hADSCs的多项分化能力。2、将hADSCs分为阴性对照组（CON组,含10%FBS的无血清细胞培养基）、阳性对照组（OM组,成人脂肪干细胞成骨诱导分化培养基）、实验组（PRP组,含有5%PRP的成人脂肪干细胞成骨诱导分化完全培养基）三组进行培养。3、CCK-8法在24、48、72h检测三组hADSCs的增殖能力。4、第14天,茜素红染色检测成骨情况,qRT-PCR检测成骨相关转录因子Runx2的表达。5、第14天,提取OM、PRP组总RNA行高通量测序,对差异表达的成骨相关miRNA进行靶基因预测及miRNA/mRNA联合分析,qRT-PCR验证成骨相关差异基因的表达。结果:1、本实验所使用的hADSCs符合鉴定标准。2、CCK-8法结果显示,与CON组相比,OM组、PRP组均可以增强hADSCs的增殖能力,48h、72h差异具有统计学意义（P<0.05）,OM、PRP组之间无显著差异（P>0.05）。3、茜素红染色结果显示,与CON组相比,PRP组有更多的钙结节形成。4、qRT-PCR结果显示,PRP组中Runx2的表达水平显著高于OM组,差异具有统计学意义（P<0.05）。5、通过miRNA测序、mRNA测序结果分析得到差异miRNA表达谱、PRP促进hADSCs成骨分化的差异mRNA表达谱。6、miRNA/mRNA联合分析、qRT-PCR验证结果显示,PRP组与OM组相比,“hsa-miR-212-5p下调/CNR1上调”、“hsa-miR-495-3p＿R+1下调/CNR1上调”。结论:1、PRP可以促进hADSCs成骨分化。2、hsa-miR-212-5p、hsa-miR-495-3p＿R+1下调及CNR1上调可能参与了PRP促进hADSCs成骨分化的过程。
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