以顺铂为代表的铂（Ⅱ）类药物已成为多种实体瘤化疗的一线用药,但其严重的毒副作用以及耐药性是临床化疗失败的重要原因。由于铂（Ⅳ）配合物具有动力学惰性以及八面体可修饰性的结构,这使其成为克服铂（Ⅱ）类药物缺陷的抗肿瘤前药候选药物,并且引起了广泛的关注。硝基苯并恶二唑（NBD）衍生物是一类含有NBD支架的化合物,能够强烈抑制谷胱甘肽S转移酶（GSTs）。其中,NBDHEX作为强效的GSTs抑制剂,近年来获得了广泛的研究。此外,我们课题组自主研发的铂（Ⅱ）配合物DN603和DN604,是两种具有高效低毒特点的抗肿瘤药物。通过连接基团,将NBDHEX片段与DN603、DN604缀合,获得了新型铂（Ⅳ）配合物DN603-NBD和DN604-NBD。体外细胞毒活性的实验结果发现DN603-NBD和DN604-NBD能有效抑制非小细胞肺癌A549细胞,尤其是顺铂耐受的A549/c DDP细胞的增殖,且显示出优于顺铂的细胞毒性。通过进一步的研究发现,两个配合物在A549/c DDP细胞中的摄取量都远高于顺铂。细胞凋亡的实验结果也表明,相比于顺铂,DN603-NBD和DN604-NBD能够引起更高的细胞凋亡率。免疫印迹的结果也证实两个配合物明显提高了Bax/Bcl-2的比值,激活了caspase 3并裂解DNA修复酶PARP,从而以caspase 3依赖性的方式诱导更高程度的细胞凋亡。由于NBDHEX的引入,DN603-NBD和DN604-NBD将A549细胞和A549/c DDP细胞的周期主要阻滞在S期,这与顺铂对肿瘤细胞的阻滞特点相同。众所周知,通过产生过量的ROS来诱导细胞凋亡也是铂（Ⅱ）类药物杀死肿瘤细胞的一种方式。因此,通过对活性氧（ROS）水平的检测发现,DN603-NBD和DN604-NBD的治疗使A549细胞和A549/c DDP细胞中都产生了较高水平的ROS。流式细胞仪对ROS荧光强度的定量测定结果也显示,两个配合物的作用能够引起较高的荧光强度,表明它们能够通过产生过量的ROS来诱导细胞凋亡。彗星实验结果表明,相比于顺铂,同等浓度下两个新型铂（Ⅳ）配合物引起的DNA损伤程度更大。同时,免疫荧光实验结果显示DSBs标志物γ-H2AX的绿色荧光强度最显著,表明这两种配合物能够引起强烈的DNA双链断裂损伤。通过免疫印记的实验证实,GSTP在耐药细胞中表达水平最高。免疫荧光实验结果也证实,两个新型铂（Ⅳ）配合物能够靶向GSTP并抑制其表达。GSTP酶抑制活性的检测结果也进一步表明,DN603-NBD与DN604-NBD能够增强对GSTP的抑制效果,在一定程度上克服了铂类药物的耐药性。为进一步研究ROS、GSTP和铂类药物耐药性之间的关系,分别用活性氧清除剂N AC以及与GSTs密切相关的JNK信号通路中JNK蛋白的抑制剂SP600125对细胞进行预处理。通过对A549细胞和A549/c DDP细胞活性检测发现,DN603-NBD和DN604-NBD实验组中活细胞数量明显增加。通过免疫印迹对JNK信号通路相关蛋白水平的检测也发现,两个新型铂（Ⅳ）配合物使JNK以及其下游靶蛋白c-Jun的磷酸化水平明显上调,而用NAC和SP600125分别预处理细胞后,JNK以及c-Jun的磷酸化水平显著降低。这些数据表明DN603-NBD和DN604-NBD通过产生过量的ROS来诱导JNK信号通路的活化,克服铂类药物的耐药性,从而诱导肿瘤细胞死亡。体内实验结果表明,DN603-NBD和DN604-NBD能够明显抑制肿瘤生长。其中,D N604-NBD对肿瘤体积的抑制效果弱于顺铂治疗组,而DN603-NBD对于实体瘤的抑制效果与顺铂相当。实验结果表明,相同剂量下顺铂的抑瘤率为59.83%,DN603-NBD抑瘤率也能达到48.32%,对肿瘤生长的抑制作用较好。此外,与顺铂相比,这两个配合物对裸鼠体重没有影响,说明其在体内对模型动物几乎没有毒副作用。一系列的生物实验结果表明,DN603-NBD和DN604-NBD是两种有潜力的新型铂（Ⅳ）抗肿瘤前药,值得进一步的研究。