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西洋参作为一种传统中药已有许多年的历史,近年来国内外学者对西洋参化学、药理及临床应用进行了大量的研究,证实其次生代谢物人参皂甙是西洋参生理活性最重要的有效成份,其药理作用十分广泛,有抗肿瘤、抗衰老、抗心律失常、抑制细胞凋亡、降糖降脂、改善学习记忆、增强免疫功能和解酒等多方面的作用。目前为止,关于西洋参药理作用的报道已有许多,但关于西洋参有效成分的生物合成途径及其调控的基础研究相对缺乏。为了探讨西洋参有效成份的生物合成途径及其调控机理,保存西洋参的资源信息库,构建了西洋参根组织全长cDNA表达文库。并对文库的质量进行了初步鉴定。本实验以西洋参根为研究材料,用Trizol方法提取西洋参根组织总RNA,反转录成单链cDNA,长距离PCR方法合成双链cDNA;PCR产物经蛋白酶K水解、纯化后,用SfiI酶切;将酶切产物进行分级分离,回收0.4kb以上的cDNA组分,并与λTriplEx2载体连接;连接产物经体外蛋白包装,产生原始文库;鉴定文库的滴度和重组效率后,进行文库扩增。随机挑取16个噬菌斑,用载体克隆位点两端的通用引物进行PCR扩增,以检测所构建的cDNA文库的质量。经测定该文库初始滴度为4.03×10~7pfu/ml ,扩增后滴度为1.75×10~9pfu/ml,重组率为86%。插入片段长度为0.3～2.0kb。同时,由于反转录过程中采用附加序列的方法使全长mRNA得到反转录,所以得到的cDNA是完整的,完全符合cDNA文库的要求。本实验成功构建了西洋参根组织的cDNA文库。从文库中随机挑选96个重组克隆测序,获得58条有效ESTs,通过NCBI数据库的BLAST程序进行相似性联配及分析。将所得到的10条新的EST序列登录在GenBank上。西洋参根组织表达型λ噬菌体cDNA文库的成功构建,不仅保存了珍贵的西洋参基因资源,而且对于西洋参中有明确功能的特异基因的克隆、表达以及新基因的克隆与功能研究奠定了物质基础。