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本实验通过研究凝血酶对体外培养的原代大鼠脑微血管内皮细胞(BMVEC)的毒性作用及加用凝血酶特异性抑制剂重组水蛭素后的细胞形态及其生化特征、遗传物质性状的变化,来证实凝血酶对大鼠脑微血管内皮细胞存在凋亡作用。同时观察胞内游离钙离子浓度的变化来探讨内皮细胞凋亡的分子机制。而探讨凝血酶的预适应现象进一步揭示凝血酶在血脑屏障损伤中的地位和作用。经实验得出如下结论:
(1)小剂量凝血酶促使脑微血管内皮细胞收缩,而大剂量凝血酶促使脑微血管内皮细胞凋亡,导致血脑屏障的损伤。
(2)凝血酶特异性抑制剂水蛭素可以完全阻断BMVEC钙离子的增加。而细胞内钙离子浓度正常化后,BMVEC的凋亡明显减少,说明细胞内钙离子至少部分地参与了凝血酶的促凋亡作用。
(3)小剂量凝血酶对BMVEC有预适应现象。综合以上结果,可以看出,凝血酶参与了BMVEC凋亡过程,加重血脑屏障的破坏,进而引起脑水肿的发生。早期应用其特异性抑制剂水蛭素,可减轻BMVEC凋亡,保护血脑屏障。重组水蛭素治疗有可能成为防治脑血管疾病的有效措施之一。凝血酶的预适应现象可为临床进行脑保护治疗寻找新的途径。