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本论文重点研究了新月弯孢霉细胞色素P450酶与甾体11 β－羟基化的关系，氢化可的松高产菌株的选育，发酵工艺条件优化，适宜的底物投料方式以及流加H2O2对甾体转化的影响等。主要研究内容和结果如下： [1] 改进了检测氢化可的松及其相关产物的高效液相色谱法。建立的适宜高效液相色谱条件为：Phenomenex Prodigy Silica（5μm，250mm×4.6mm i．d．）硅胶吸附色谱柱，流动相为二氯甲烷-乙醚-甲醇-水（体积比385：60：30：2），检测波长242nm，流速0.8mL／min。该方法准确，灵敏，重现性好，15min完成一个分析过程。 [2] 确立了新月弯孢霉原生质体的适宜形成与再生条件：将培养22h的菌丝用0.3mol／L的二硫苏糖醇处理20min，0.6mol／L的KCl作为渗稳剂，30℃条件下经0.5％新生酶234和1％纤维素酶混合液（pH5.6）酶解3h，原生质体释放量达到7.76×106个／mL，再生率为23.07％。再生菌株菌落形态不变，保留了甾体11 β-羟基化能力。 [3] 通过CO差光谱法检测到新月弯孢霉原生质体中存在细胞色素P450酶。苯巴比妥钠和邻苯二甲酸异辛酯对P450酶具有诱导作用。酮康唑对P450酶具有抑制作用。证实了P450酶是胞内酶。P450酶含量与氢化可的松的生成具有正相关性。 [4] 采用亚硝基胍和紫外线复合诱变，结合酮康唑抗性筛选法，选育出氢化可的松高产菌株KA-91。RSA投料浓度为1.0g／L时，在未优化条件下发酵72h，氢化可的松转化率达到63.05％，氢化可的松对RSA的收率达到53.3％。将菌株KA-91连续5次转接斜面，发现菌株遗传性能稳定。结合试验结果，对诱变育种的机理进行了简要分析。推测新月弯孢霉产生酮康唑抗性可能是由于14α-脱甲基酶P450超量表达所致。 [5] 证实了底物RSA对P450酶具有诱导作用。在分析底物RSA诱导P450酶表达的基础上，结合pH值对P450酶诱导和氢化可的松产生的影响，提出了生产氢化可的松的新发酵工艺：菌体生长至16h投入0.3g／L的RSA，培养至24h补加0.7g／L的RSA，继续培养至32h，调节pH值至6.5，以后每12h调节一次pH，发酵周期72h。 [6] 分别考察了有机溶媒法、表面活性剂吐温80分散法、高聚物硅酮乳化法、超声波振荡法以及β-环糊精包结法等处理底物对甾体转化的影响。最终确定了适 摘要宜的底物投料方式:向底物RSA与1 .2%吐温80的混悬液中加入p一环糊精（与RSA摩尔比为l:1），湿热灭菌20min投料。 I7]确立了KA一91生产氢化可的松的适宜摇瓶分批发酵条件:培养基（岁L）:葡萄糖22.5，牛肉膏5.5，酵母膏5.0，KHZPO43.O;装液量30mL/2 50mL三角瓶;摇瓶转速0一6h:160 r/min;6一72h:加or/mln;发酵温度28℃;发酵周期72h。采用改进工艺和适宜投料方法，RsA投料浓度为1 .0留L时，氢化可的松转化率达到74.88%。 以适宜摇瓶分批发酵条件为基础，对氢化可的松高产菌株KA一91进行了7L罐分批发酵试验，发酵周期68h，RsA投料浓度为1 .09几时，氢化可的松转化率达到77.92%。 18]探讨了1 lp一经基化过程中流加过氧化氢对氢化可的松产生的影响。摇瓶实验表明流加过氧化氢可以提高氢化可的松的产量。分析了流加玩02促进凿体转化的机理为:（l）改善传质过程，提供分子底物氧;（2）诱导细胞色素P450酶的表达，促进代谢酶活力;（3）通过更有效的P450酶代谢过程—HZO:旁路途径进行幽体底物的无氧氧化。 本论文在幽体转化领域的创新之处在于: 111首次结合酮康哇抗性筛选法，采用亚硝基肌和紫外线复合诱变选育氢化可的松高产突变株。该筛选方法快速有效，最终筛选到一株高产酮康哇抗性突变株KA一91，底物投料浓度1.og/L时，氢化可的松转化率63.05%，氢化可的松对RSA的收率为53.3%。 121证实了P450酶在新月弯抱霉街体转化中具有关键作用，基于底物RSA、pH值对P450酶的诱导和氢化可的松产生的影响，提出了生产氢化可的松的新发酵工艺。 131在幽体11p一轻基化过程中流加HZO:可以提高氢化可的松的转化率。