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目的:已有研究证明乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)聚合酶Polymerase(Pol)与人核不均一性核糖核蛋白(hn RNPK)之间存在相互作用。大量文献表明,hn RNPK的KI结构域为蛋白相互作用结构域,为了探寻Pol与hn RNPK的相互作用是否是通过KI结构域进行的,拟分别构建缺失KI结构域的hn RNPK重组质粒以及单独的KI结构域的重组质粒,通过GST-pulldown结合Co-immunoprecipitation(co-ip)的方法检测其与Pol之间的相互作用。该研究旨在探寻宿主蛋白hn RNPK与pol的相互作用结构域,拟为探明HBV Pol与hn RNPK的相互作用机制,寻找乙肝病毒治疗新靶标提供理论基础。方法:1)本文先构建缺失KI结构域的hnRNPK重组质粒pGEX-4T-1-ΔKI,IPTG诱导GST-ΔKI融合蛋白表达,通过GST-pulldown实验发现其与Pol不存在直接的相互作用。2)构建融合HA标签的KI结构域缺失型hn RNPK真核表达重组质粒pc DNA3.1-ΔKI-HA,与Pol-flag共转Hela细胞后,通过co-ip实验检测KI缺失型hn RNPK在细胞生理环境中能否与Pol发生相互作用,并验证GST-pulldown的结果。3)为了进一步探索KI结构域是否是hn RNPK与Pol相互结合时的主要结构域,本文构建了只含有KI结构域的重组质粒p GEX-4T-1-HD,IPTG诱导GST-HD融合蛋白表达,通过GST-pulldown实验检测其与Pol的相互作用。4)构建融合了HA标签的KI结构域重组质粒pc DNA3.1-HD-HA,与Pol-flag共转Hela细胞,运用co-ip技术检测KI单独结构域在细胞生理环境中能否与Pol发生相互作用,并验证GST-pulldown的结果。结果:p GEX-4T-1-ΔKI与pc DNA3.1-ΔKI-HA重组质粒构建成功,通过GST-pulldown与co-ip实验均发现缺失了KI结构域的hn RNPK不能与Pol发生相互作用。p GEX-4T-1-HD与pc DNA3.1-HD-HA重组质粒构建成功,通过GST-pulldown与co-ip实验检测到其与Pol存在相互作用。结论:分别检测缺失KI结构域的hn RNPK与单独的KI结构域同Pol之间的相互作用,发现了在缺失KI结构域的情况下,hn RNPK丧失了与Pol相互作用的能力,而其单独的KI结构域能够保持与Pol的相互作用,说明hn RNPK主要通过其KI结构域与Pol发生相互作用。该研究为揭示hn RNPK参与协助Pol行使其功能的机理奠定了基础。