PRMT2稳定低表达对MCF-7细胞自噬的影响及机制研究

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目的:明确蛋白精氨酸甲基转移酶2(protein arginine methyltransferase 2,PRMT2)对人乳腺癌MCF-7细胞自噬的影响,并初步探讨其可能的分子机制。方法:根据MCF-7细胞中PRMT2表达水平分为PRMT2稳定低表达组及PRMT2正常水平表达组。首先,蛋白质免疫印迹法(Western Blot,WB)分别检测两组细胞中自噬相关蛋白Beclin1、LC3(light chain3,轻链3)的表达,初步探讨PRMT2低表达对细胞自噬的影响。其次,WB方法分别检测两组细胞中自噬信号通路分子mTOR、ULK1、p-AMPK、AMPK(mTOR:mammalian target of rapamycin,雷帕霉素靶蛋白;ULK1:unc-51-like kinase 1,unc-51样激酶1;AMPK:Adenosine monophosphate-activated protein kinase,单磷酸腺苷活化蛋白激酶)的表达并进行分子机制的初步研究。第三,应用免疫共沉淀方法初步研究PRMT2影响自噬的可能信号通路。结果:1.WB检测结果表示:PRMT2稳定低表达的MCF-7细胞中,自噬相关蛋白(Beclin1、LC3)表达增加。2.PRMT2稳定低表达的MCF-7细胞中,mTOR、ULK1、p-AMPK表达均上调,AMPK表达水平与普通MCF-7组无明显差异。3.免疫共沉淀结果表示:MCF-7细胞中,PRMT2与AMPK之间以及Beclin1与PRMT2及AMPK之间均存在相互作用。结论:MCF-7细胞中,PRMT2可能通过与AMPK相互作用,经AMPK/ULK1/Beclin1途径,影响细胞自噬水平。
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