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目的(1)了解我院2015-2019年分离的耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌(Carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii,CRAB)的耐药情况,总结CRAB的检出率并分析CRAB的科室分布及标本来源情况。(2)收集2019年1-6月重症监护病房(Intensive Care Unit,ICU)中分离的42株CRAB进行相关耐药机制的研究并分析其分子流行病学特征。(3)探讨CRAB的联合用药方案,为临床抗感染治疗和改善患者预后提供可靠依据。方法(1)应用Whonet5.6回顾性分析我院2015-2019年各年度CRAB耐药情况,并对近五年鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,AB)和CRAB分离株的药敏结果进行了比较,总结CRAB的检出率并分析CRAB的标本来源及科室分布情况,通过SPSS20.0对数据进行分析整理。(2)运用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)检测CRAB中碳青霉烯酶基因(OXA-23、OXA-24、OXA-48、OXA-51、OXA-58、KPC、VIM、IMP、NDM)的表达情况。(3)通过外排泵抑制实验分析CRAB外排泵的表达情况。(4)采用多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)技术分析CRAB的克隆相关性及分子流行病学特征。(5)采用微量棋盘稀释法进行四种联合用药方案的药敏试验,分析不同抗菌药物组合对CRAB的抗菌活性,联合方案分别为:亚胺培南+多粘菌素E、亚胺培南+替加环素、米诺环素+多粘菌素E、环丙沙星+替加环素。结果(1)耐药分析显示我院2015-2019年各年度CRAB对常用抗菌药的耐药性均较高。近五年AB和CRAB分离株的药敏结果比较显示:AB对左旋氧氟沙星和复方新诺明的耐药率最低,分别为40.52%和58.06%,对其它抗菌药物的耐药率均>72.48%。而CRAB除对左旋氧氟沙星(50.95%)和复方新诺明(72.62%)耐药率稍低外,对其它12种常规抗生素的耐药率均>93.04%。喹诺酮类抗生素中左旋氧氟沙星对CRAB的抗菌活性远高于环丙沙星,二者耐药率分别为50.95%和99.45%,差异有统计学意义(P<0.05)。CRAB对本研究中14种抗菌药物耐药率均高于AB,除头孢唑啉、头孢呋辛、头孢替坦和呋喃妥因外,差异均具有统计学意义(P<0.05)。(2)2015-2019年CRAB的检出率为76.95%,各年度检出率呈逐年递减的趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)CRAB科室分布以ICU(30.26%)、神经外科(17.82%)和呼吸内科(15.01%)占比最多,标本来源以痰液(81.15%)为主。(4)本研究中的42株CRAB均携带OXA-23和OXA-51基因,其中OXA-51为AB的固有基因,未检测到OXA-24、OXA-48、OXA-58、KPC、VIM、IMP和NDM基因。(5)外排泵表型实验结果显示加入羰基氰氯苯腙(carbonylcyanide-m-chlorophenylhydrazone,CCCP)后有16株菌的亚胺培南最低抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC)值下降了4-8倍,实验菌株外排泵表型阳性率为38.09%(16/42)。(6)42株CRAB共分为10个ST型,以ST 1145(13株)、ST 1417(8株)和ST 208(7株)为主,其余分型为ST 16584株,ST 540 3株,ST 938和ST 195各2株,ST 1779、ST 1696和ST 1646各1株,且ST1417型和ST208型之间只有两个等位基因(gpi和rec A)有差别,ST1145型与ST1417型之间只相差一个等位基因gpi,ST1145型和ST208型的等位基因谱也仅rec A位点不同,剩余6个等位基因均一致,说明耐药菌株间存在一定的亲源性。(7)联合药敏结果显示:大多数菌株联合用药组的MIC值与单一用药时相比有所降低,四种联合方案均可被考虑用于临床实践中以达到更好的杀菌效果,尤其是只表现为协同和相加作用的亚胺培南+多粘菌素E组和米诺环素+多粘菌素E组。结论(1)我院CRAB分离株对常用抗菌药物耐药情况严峻,近五年CRAB的检出率逐年下降,CRAB科室分布以ICU(30.26%)占比最高,标本来源以痰液(81.15%)为主。(2)CRAB的耐药机制主要是产OXA-23基因型的碳青霉烯酶,其次是外排泵的表达。(3)42株CRAB以ST1145型(30.95%)、ST1417型(19.05%)和ST208型(16.67%)为主,且不同ST型之间只相差一个或两个等位基因,说明为遗传相关克隆。(4)亚胺培南+多粘菌素E和米诺环素+多粘菌素E两种组合对CRAB具有更好的抑菌效果,可作为临床抗感染治疗的新思路。