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研究背景：去势抵抗型前列腺癌是目前临床治疗的难点和基础研究的热点,许多研究者专注于雄激素-雄激素受体,开发新型的抑制雄激素合成药物和雄激素拮抗剂等等。还有一些研究者开始转向其他基因或者通路。前期研究发现睾丸孤核受体4(TR4)与氧化应激、基因修复、代谢等有关。这些功能都于肿瘤有密切关系。然而,目前尚无TR4与肿瘤的直接研究报道。研究目的：本项研究有两个研究目标：第一是明确TR4和前列腺癌进展之间的关系；第二是深入探索TR4在前列腺癌进展中作用的机制。研究方法：1.运用慢病毒感染技术建立不同TR4表达水平的前列腺癌细胞系,检测其细胞增殖、迁移、侵袭力的差异。我们建立了2个TR4基因敲除前列腺癌细胞系(C4-2scr/siTR4, TRAMP-C1scr/siTR4)和2个TR4基因过表达细胞系(CWR22Rv1vector/TR4和PC3vector/TR4).采用MTT法检测其增值能力,transwell法检测细胞迁移和侵袭力。2.建立人前列腺癌细胞系CWR22Rv1-luc-裸鼠前列腺原位移植模型。CWR22Rv1-luc细胞系是CWR22Rv1被转染了荧光素酶基因(1uc)并挑出单克隆扩增而成,随后,过表达TR4构建成CWR22Rv1-luc-TR4及其对照组并通过外科手术的方式移植到裸鼠前列腺中。借助于luc我们可以利用小动物活体荧光成像系统(IVIS)检测肿瘤的生长及转移情况。3.为了明晰TR4与前列腺癌之间联系的机制,我们进行了多种分子生物学实验和细胞实验。首先,应用qPCR技术筛选与前列腺癌转移有关的基因,运用western blotting和ELISA在蛋白水平进一步证实。然后采用中立实验来验证确实是这一基因介导了TR4与前列腺癌之间的关系而不仅仅是共同变化。最后采用荧光素酶报告基因分析(luciferase assay)和染色质免疫共沉淀技术(CHIP)来分析TR4调节这一下游基因的具体分子机制。研究结果：1.体外实验表明TR4对前列腺细胞增值无明显影响,但显著增加前列腺癌细胞的迁移和侵袭力。我们检测了C4-2scr/siTR4和CWR22Rvl vector/TR4两对不同TR4水平的细胞系,发现TR4对细胞增值无明显影响。迁移和侵袭实验中,C4-2和TRAMP-C1细胞系敲除TR4后迁移和侵袭力均显著下降。CWR22Rv1和PC3过表达TR4后迁移和侵袭力显著增强。2.在CWR22Rv1-luc-裸鼠前列腺原位移植模型中,CWR22Rv1-luc-TR4组的前列腺癌转移发生时间较早,远处转移发生率较高。然而,肿瘤大小却无明显差别。免疫组化证实CWR22Rv1-luc-TR4的肿瘤组织MMP9表达水平较高。3. qPCR筛选到多个与前列腺癌转移有关的基因表达水平受TR4的影响,其中CCL2的变化最为显著,而且其受体CCR2的表达也随着TR4的下降而下降。进一步的ELISA亦验证了CCL2的蛋白变化较为显著。中立实验中采用CCR2拮抗剂可以阻断TR4增加的前列腺癌迁移和侵袭力。动物试验中,CCR2拮抗剂亦抑制了TR4促进的前列腺癌转移。Luciferase assay和CHIP证实TR4是在转录水平上调节CCL2的表达。结论：本文的研究结果有两点：①TR4可以促进前列腺癌转移；②-CCR2通路介导了TR4促进的前列腺癌转移。