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枸杞多糖（Lycium barbarum polysaccharides,LBP）是中草药枸杞的主要活性成分。我们前期研究发现,LBP能促进树突状细胞（Dendritic cells,DC）的成熟,显示良好的佐剂效应。但其促进DC成熟的具体机制尚不清楚,本研究以TLR4为切入点,探讨其促进DC成熟的分子机制。目的:研究LBP促进DC成熟及亚型分化的分子机制,促进DC诱导T细胞分化的作用,为LBP开发为新型佐剂奠定基础。方法:1.体外实验观察LBP促进DC成熟的分子机制及其对DC亚型相关转录因子的影响无菌分离小鼠骨髓来源树突状细胞,用粒单核集落刺激因子（Granulocyte-mononuclear colony-stimulating factor,GM-CSF）和重组鼠白细胞介素4（Interleukin-4,IL-4）刺激,培养7天,此时为未成熟的DC,然后做如下研究:1.1分别用不同浓度的LBP刺激未成熟DC,以100 ng/mL LPS作为阳性对照:（1）LBP刺激24 h后,采用流式细胞术（Flow Cytometry,FCM）检测细胞表面分子CD11c、MHCII、CD80、CD86的表达;酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测细胞培养上清中IL-6、IL-4的水平。（2）LBP刺激30 min后,分别通过Taqman-PCR和蛋白质免疫印迹实验（Western Blot,WB）检测DC中TLR4通路中相关分子NFκB、p38、Erk、JNK、Blimp1 mRNA和蛋白的表达水平。（3）LBP刺激30 min后,Taqman-PCR检测转录因子Irf4、Irf5、Irf8和Batf3 mRNA表达水平;WB检测转录因子IRF4、IRF5、IRF8蛋白表达水平。1.2分别阻断TLR4通路中关键分子TLR4、NFκB、p38、Erk、JNK和Blimp-1,然后加入LBP刺激30 min,Taqman-PCR和WB分别检测通路相关分子mRNA和蛋白表达水平。1.3卵清蛋白（Ovalbumin,OVA）预处理未成熟DC 2 h,再加入LBP刺激24 h,与CD4+T淋巴细胞共培养,72 h后,FCM检测初始CD4+T细胞分化为Th1、Th2、Treg、Tfh细胞的比例;ELISA检测细胞培养上清中IL-6、IL-4、TNF、IFNγ的含量。2.体内实验研究LBP对DC中TLR4通路相关分子及DC亚型相关转录因子的影响分别用不同浓度LBP腹腔注射给C57BL/6小鼠,腹腔注射1 mg·kg-1·d LPS作为阳性对照,连续注射7天,WB检测脾脏CD11c+DC中TLR4、NFκB、p-NFκB、p38、p-p38、Erk1/2、p-Erk1/2、JNK、p-JNK、Blimp1、IRF4、IRF5和IRF8蛋白的表达水平。结果1.体外实验观察LBP促进DC成熟的分子机制及其对DC亚型相关转录因子的影响1.1 LBP能促进DC表面CD11c、MHCII及共刺激分子CD80和CD86的表达,促进DC分泌IL-6和IL-4;增强DC中TLR4通路中关键分子NFκB、p38、Erk1、Erk2、JNK、Blimp1及DC亚型相关转录因子IRF4、IRF5、IRF8、Batf3 mRNA和磷酸化蛋白表达水平。1.2 TLR4通路中关键分子TLR4、NFκB、p38、Erk、JNK和Blimp-1被阻断后,能有效干预LBP促进DC中TLR4通路中下游分子的表达。1.3 LBP能促进DC诱导初始CD4+T细胞分化为Tfh细胞,增加细胞培养上清中IL-6、IL-4、TNF的含量。2.体内实验研究LBP对DC中TLR4通路相关分子的影响小鼠体内实验显示,LBP增强小鼠脾脏CD11c+DC TLR4通路中p-NFκB、p-p38、p-Erk1/2、Blimp1分子和DC亚型相关分子IRF4、IRF8蛋白的表达。结论:LBP可通过TLR4-NFκB/Erk1/2-Blimp1信号通路促进DC成熟,并诱导cDC1s和cDC2s的分化。LBP可促进DC诱导Tfh细胞的分化。