论文部分内容阅读
鸡马立克氏病是鸡的一种常见传染病,除有报道马立克氏细胞和动脉粥样硬化可以作为马立克氏病(Marek’s Disease, MD)肿瘤产生前的早期组织病理学诊断的依据外,再没有关于MD的早期分子生物学诊断研究。在国内外(除本实验室)利用微卫星不稳定性(Microsatellite Instability, MSI)对MD早期诊断的报道更是少见。本试验主要通过对SPF白色来航鸡分别免疫HVT疫苗和感染MDV-RBIB株,跟踪观察并利用微卫星分析宿主基因组MSI,旨在发现接种HVT疫苗和感染MDV-RBIB株后,宿主之间发生MSI位点的差异,利用这些有差异的微卫星位点为马立克氏病早期诊断提供试验资料。分别对20只和40只SPF鸡免疫HVT疫苗和感染MDV-RBIB株,设定动态翅内静脉抗凝血采集时间,采血试验到期后剖检观察并采集肿瘤组织和健康肌肉组织;提取血液淋巴细胞、肿瘤组织和健康肌肉组织中的核酸DNA；对本实验室前期人工感染MDV的鸡胚成纤维细胞后鸡的全部染色体中发生MSI高于30%的微卫星位点进行初步筛选,获得46个微卫星位点；以这46个微卫星位点设计引物进行PCR扩增、经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染后,检测试验鸡的MSI。SPF鸡接种HVT疫苗后,用初步筛选的46个微卫星位点进行MSI检测,宿主外周血淋巴细胞DNA发生MSI变化的位点有26个,占所选位点的56.5%；在免疫后3天内有20个位点发生MSI,占总变化位点数的76.9%；在试验结束前的最后一次采样中有9个微卫星位点发生MSI的现象消失,占总变化位点的34.6%。而SPF雏鸡感染MDV-RB1B株后,同样用初步筛选的46个微卫星位点进行MSI检测,外周血淋巴细胞和肿瘤组织DNA发生MSI变化的位点有30个,占所选位点的65.2%；在外周血淋巴细胞DNA发生MSI变化的位点中,ABR0365等15个微卫星位点与肿瘤组织DNA发生MSI的变化微卫星位点具有一致性,占总变化位点的50%；而ABR0365等7个微卫星位点在MDV-RBIB感染SPF雏鸡中的淋巴细胞和肿瘤组织DNA发生MSI一致,但在疫苗组鸡中的外周血淋巴细胞DNA并没有发生MSI。本试验通过对SPF白色来航鸡分别免疫HVT疫苗和感染MDV-RB1B株,跟踪观察并利用微卫星进行宿主基因组MSI分析,发现：ABR0365、ABR0387、ABR0007、 ABR0389、 ABR0617、 ABR0659、 ADL01477个微卫星位点在患鸡淋巴细胞和肿瘤组织发生MSI一致性但在疫苗组中没有发生MSI;ABR0033和ABR0392个微卫星位点在患鸡淋巴细胞中发生了MSI,但在接种疫苗HVT的鸡只中并没有发生MSI；MCW0145在患鸡淋巴细胞中发生了MSI的鸡有4只而在疫苗组中只有1只鸡,所以也可作为一早期诊断的位点；另外,为了涵盖所有的鸡只,所以选出取29和38号鸡都发生MSI的微卫星点ABR0204,所以也可作为一早期诊断位点。也就是说,利用ABR0365、ABR0033和MCW0145等13个微卫星位点可以对MD进行早期诊断。