非黑素瘤性皮肤肿瘤（nonmelanoma skin cancer，NMSC）包括鳞状细胞癌（squamous cell carcinoma，SCC）、基底细胞癌（basal cell carcinoma，BCC）、光线性角化病（actinic keratosis，AK）、角化棘皮瘤等，是最常见的皮肤肿瘤，其中SCC是我国最常见的NMSC。随着生活方式和生活环境的改变，NMSC的发病率呈逐年上升趋势，由此产生的大量社会负担和医疗负担不容忽视。NMSC的发病与年龄、肤色、人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）感染、紫外线损伤、长期使用免疫抑制剂（如器官移植受者、艾滋病患者）等多种因素相关。其中HPV感染、紫外线损伤是其发病的主要危险因素。HPV是一类小的双链闭环DNA病毒，与许多疾病的发生相关，迄今已发现约130种HPV亚型，并将其归为16个种属（如α、β、γ、u-HPV等）。目前已经明确α-HPV可导致宫颈癌发生，而β-HPV与NMSC密切相关。然而，尽管β-HPV是NMSC发生重要危险因素，是否也存在致病的高危亚型，其致病机理如何，目前仍不清楚。与α-HPV不同，β-HPV的致病机制研究刚刚起步，目前多认为β-HPV与紫外线联合导致NMSC的发生。肿瘤的发生与多种因素相关，病毒感染是肿瘤发生的重要生物因素，然而病毒感染导致肿瘤发生的机制尚不清楚。细胞自噬是Ⅱ型程序性死亡，广泛存在于真核细胞。正常情况下，自噬发挥着“清道夫”的作用，吞噬、降解受损的细胞器和病原微生物，是一种重要的防御和保护机制。细胞自噬异常与肿瘤的发生、发展密切相关，在肿瘤进展的不同阶段，细胞自噬发挥的效应也不同。在肿瘤早期，细胞自噬可能发挥着抑癌的作用，在肿瘤后期则可能会促进癌症的发生。如何积极利用细胞自噬抑制癌细胞增殖的功能，最大程度遏制其促癌效应是未来研究的重中之重。本研究检测192例NMSC及80例正常对照新鲜组织中β-HPV DNA，旨在了解我国西北地区NMSC中β-HPV感染情况，并通过进一步对阳性标本进行β-HPV分型以明确可能致病的高危亚型；通过免疫组化检测NMSC中自噬水平变化及相关信号通路改变，初步探讨β-HPV感染引起的细胞自噬在NMSC中的致病机理。实验目的：1.了解我国西北地区NMSC中β-HPV流行现状。2.明确在NMSC中具有关键致癌作用的β-HPV亚型。3.初步探讨细胞自噬在β-HPV感染与NMSC发病中的作用。实验方法：首先，我们收集经病理确诊的192例NMSC及80例正常对照新鲜组织，通过巢式PCR检测NMSC中β-HPV DNA，PCR检测α-HPV DNA，并采用巢式PCR的方法比较石蜡组织中β-HPV感染率；其次，我们应用特异型PCR引物对筛选出的阳性标本进行β-HPV分型；经统计分析得出可能具有关键致癌作用的β-HPV亚型，利用免疫组织化学技术观察HPV感染后AK与SCC自噬水平及相关信号通路的改变；最后，采用透射电镜观察NMSC中自噬水平的变化。实验结果：1.分析我国西北地区NMSC中β-HPV流行现状：采用巢式PCR检测NMSC新鲜组织中β-HVP DNA结果表明，50例AK、20例SCC、50例BCC、72例脂溢性角化病（seborrheic keratosis，SK）、80例正常对照中β-HPV阳性率分别为80%、75%、44%、21%和35%。经统计分析，AK和SCC中β-HPV阳性率远高于对照组，P<0.05，ORAK=8.75，ORSCC=5.469。而SK、BCC检出率较对照相比，差异无统计学意义。不同来源正常皮肤中，来自AK、SCC对照中β-HPV阳性率较健康对照组织明显增高，结果有统计学意义。AK、SCC、BCC、SK与自身对照β-HPV检测结果显示，AK、SCC周围正常皮肤中β-HPV阳性率显著高于其他病例组。2. NMSC中α-HPV感染分析：α-HPV DNA检测结果显示，无论是AK、SCC、SK、BCC还是正常对照，α-HPV阳性率均较低，差异无统计学意义；α-HPV与β-HPV混合感染AK1例、SCC1例、对照组2例。SK与BCC无混合感染。3.石蜡组织中β-HPV感染分析：同样采用巢式PCR法检测AK和SCC石蜡组织中β-HPV DNA，阳性率AK62.5%（15/24），SCC44%（11/25），正常对照8.3%（1/12），AK和SCC中β-HPV检出率较对照明显增高，但是与新鲜组织相比β-HPV阳性率均较低。4. β-HPV特异性分型：利用12种β-HPV（HPV5、8、15、17、19、20、21、23、36、38、49、80）特异性PCR引物对阳性标本进一步分型，结果显示：在AK和SCC中，HPV38检出率最高，其中，15例SCC中β-HPV38阳性者为12例（80%），40例AK中阳性者25例（62.5%）。而在SK及正常皮肤中以上12种HPV检出率均较低。5.免疫组化分析NMSC中自噬变化：免疫组化结果显示，与正常对照（HPV+/HPV-）相比，HPV感染后各病例组（HPV38+/HPV38-）LC3、Beclin1表达均增高，特别是在HPV38+SCC组阳性着色细胞最多，颜色最深（P<0.001），自噬水平明显升高；p62在正常皮肤中呈弱阳性表达，在SCC中无明显阳性着色（P<0.05）。6.免疫组化分析NMSC中PKR信号通路：与对照组相比，HPV感染后（HPV38+/HPV38-），各病例组PKR、p-PKR、eIf2α、p-eIf2α表达均增高（P<0.05），尤其HPV38+AK组p-PKR、p-eIf2α表达明显高，而SCC较对照组无显著差异。7.透射电镜（transmission electron microscope，TEM）观察NMSC自噬超微结构：HPV38+SCC组织中自噬小体数目明显多于AK和正常对照组（P<0.001），该结果与免疫组化一致。主要结论：1.β-HPV在AK和SCC中检出率远高于对照组，提示β-HPV与AK、SCC的发生，发展密切相关。2.HPV38是与AK、SCC发生密切相关的主要亚型。3.AK、SCC中细胞自噬水平升高，提示：一方面，在SCC发生早期阶段（即癌前病变AK），自噬水平增高可清除受损的细胞器维持基因组稳定性发挥抑癌作用；另一方面，在SCC进展期，过度诱导自噬可为细胞转化提供营养和能量，促进癌细胞在恶劣环境下生存、增殖。4. HPV38可能通过激活PKR-eIf2α信号通路诱导自噬水平增高。