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背景及目的： P.gingivalis作为慢性牙周炎最主要的致病菌，除了导致口腔局部炎症外，还可能影响心血管系统健康。大量研究表明P.gingivalis及其毒力因子与内皮功能障碍有直接的关系。有研究表明内皮细胞与平滑肌细胞间的信息交流在As发生发展过程中起重要作用，而外泌体作为细胞旁分泌的重要介质，广泛参与了各类信息物质的分泌和摄取过程，介导着细胞间信号转导过程。本研究通过分析IIfimA型P.gingivalis的主要毒力因子菌毛蛋白对平滑肌细胞源外泌体作用下内皮细胞相关功能的影响，进一步探讨P.gingivalis在As发生和发展过程中的可能作用。 方法： (1)采用酶消化法体外培养HUVECs，组织块贴壁法体外培养HUASMCs，免疫荧光鉴定所培养的细胞；用PEG法提取平滑肌细胞源外泌体（HUASMCs-Exo），并行Western blot鉴定其表面标记蛋白CD63、CD9的表达情况，以电镜鉴定其大小和形态，以DiI染色外泌体，并将之与HUVECs共培养24h，观察HUVECs对 HUASMCs-Exo的内化摄取情况。（2）用不同浓度（0.1、1、5、10μg/ml）的IIfimA型P.gingivalis-rFimA处理HUVECs不同时间（2、8、24、48h），采用CCK-8检测细胞的增殖活性，并确定P.gingivalis-rFimA处理HUVECs的最适浓度和时间；后续实验分为4组：①正常组（Normal组）：HUVECs不予任何处理；②HUASMCs-Exo组：HUASMCs-Exo与HUVECs共培养；③rFimA组：rFimA处理HUVECs；④HUASMCs-Exo+rFimA组：HUASMCs-Exo与HUVECs共培养后，加入rFimA处理；FACS检测各组细胞总体凋亡率、存活率及坏死率，RT-PCR检测各组细胞内IL-18及Caspase-3 mRNA的表达情况，Western blot检测各组细胞内Cleaved caspase-3蛋白表达情况，ELISA检测各组细胞上清液中IL-18的表达情况。 结果: （1）原代培养的HUVECs和HUASMCs两种细胞生长状态良好，并均经形态学和免疫荧光鉴定确认；采用PEG法成功提取、鉴定了HUASMCs-Exo，并可被HUVECs内化摄取，可用于后续实验。 （2）CCK-8结果示10μg/ml浓度的rFimA处理HUVECs48h时，细胞增殖活性最低，所以用10μg/ml浓度的rFimA处理HUVECs48h行后续实验。FACS结果示：与Normal组相比， HUASMCs-Exo组细胞总体凋亡率无明显差异（P>0.05），而rFimA组和HUASMCs-Exo+rFimA组均可导致HUVECs总体凋亡率升高（P<0.05）；与rFimA组相比，HUASMCs-Exo+rFimA组可下调rFimA作用下HUVECs的总体凋亡率。RT-PCR、Western blot和 ELISA结果示：Normal组与HUASMCs-Exo组细胞IL-18mRNA和Caspase-3 mRNA、凋亡主要效应蛋白Cleaved caspase-3及细胞上清液中IL-18水平均无明显差异（P>0.05）；与Normal组相比，rFimA组和HUASMCs-Exo+rFimA组细胞IL-18mRNA和Caspase-3 mRNA、Cleaved caspase-3及细胞上清液中IL-18水平均增加（P<0.05），而HUASMCs-Exo+rFimA组可下调rFimA作用下各检测指标的表达量（P<0.05）。 结论： IIfimA型P.gingivalis-rFimA可诱导HUVECs凋亡和炎症因子IL-18的表达，而HUASMCs-Exo虽然可在一定程度上调控P.gingivalis-rFimA诱导的HUVECs凋亡和炎症反应，仍无法改变HUVECs功能异常的结果。因此，P.gingivalis的主要毒力因子菌毛蛋白可能在促进As发生、发展中发挥一定的作用。