论文部分内容阅读
手术切除是治疗肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的主要方法，但术后五年复发率高达50％，转移复发是影响治疗效果的主要因素。 染色体8p的改变与多种肿瘤相关。研究结果表明染色体8p缺失和肝癌的转移有关，更精细的全基因组微卫星扫描分析发现在染色体8p11.2和8p23.3上存在两个较高频率的杂合性缺失位点。本课题的目的是通过研究位于染色体8p上的EST在高低转移细胞株(MHCC97H和MHCC97L)的差异表达，筛选出与肝癌转移抑制相关的候选基因。 为了获得染色体8pEST的cDNA克隆，我们首先构建了一个肝癌cDNA文库，筛选到了18个位于染色体8p的克隆并加上从其它途径获得的染色体8p相关的cDNA克隆，最后我们成功地构建了主要针对染色体8p的cDNA微阵列，该阵列包括染色体8p所有区段的100个EST和1100个与细胞信号传导相关cDNA克隆，为利用cDNA微阵列筛选在染色体8p上的肝癌转移相关基因提供了基础。 应用上述构建的cDNA微阵列，对肝癌高低转移细胞株差异表达的基因进行了比较，发现(1)MHCC97H与MHCC97L表达差别大于2倍的有384个基因，其中在MHCC97-H中82个基因表达上调，302个基因下调。(2)高低转移细胞株相比在染色体8p上共有12个差异表达EST，占检测的染色体8p上所有EST的12％。其中6个位于8p22-23，3个位于8p11。在高转移细胞株中有2个EST表达上调，10个EST表达下调。(3)在MHCC97H细胞株中下调最显著的30个基因中，有8个基因和NF-κB细胞信号传导有关，提示NF-κB信号传导通路的异常改变与肝癌转移可能有关。(4)随机选取了染色体8p上的4个EST经RT-PCR检测的表达结果与cDNA微阵列结果一致。以上结果说明肝癌高低转移细胞株基因表达存在差异，这些基因的差异性表达与肝癌细胞的转移潜能有关。 进一步选取了一个经cDNA微阵列筛选的、在MHCC97L高表达而在MHCC97H低表达的、位于染色体8p的EST46——HTPAP基因，克隆了该基因的全长并构建了HTPAP基因的表达质粒和对应的反义核酸表达质粒，对其凋亡和侵袭性进行了初步鉴定，发现：(1)转染HTPAP基因后在高低转移细胞株中均促进细胞凋亡，而转入HTPAP基因的反义核酸后细胞凋亡明显减少(P＜0.05)。(2)HTPAP基因可以抑制高转移细胞株MHCC97H的侵袭性，而反义RNA则可以解除这种抑制(P＜0.01)。我们推测这种对侵袭性的影响可能和HTPAP基因增加MHCC97H的细胞凋亡有关。所有这些特性都使HTPAP基因成为一个很有希望的抑制肝癌转移的靶基因。 综上所述，高低转移细胞株在染色体8P上存在差异表达基因，其中HTPAP基因是一个抑制肝癌转移的候选基因。