论文部分内容阅读
第一部分代谢型谷氨酸受体5拮抗剂MPEP对左旋多巴诱发异动症大鼠行为学影响的研究目的:制备帕金森病(PD)及左旋多巴诱发异动症(LID)大鼠模型,观察代谢型谷氨酸受体5(mGlu R5)拮抗剂MPEP对PD及LID大鼠行为学的影响。方法:55只SD大鼠于右内侧前脑束立体定向注射6-羟基多巴(6-OHDA),制备单侧毁损PD大鼠模型。按随机数字表法选取40只成功PD大鼠分为四组(每组10只):生理盐水组;L-DOPA组;MPEP组;MPEP+L-DOPA组。每组大鼠每日2次腹腔注射生理盐水或相应治疗药物,持续21天。在给药治疗的第2、9、11、18、21天进行对侧旋转反应时间、前肢跨步数及异常不自主运动(AIM)等行为学评价。结果:1.在21天治疗过程中,生理盐水组大鼠治疗前后毁损对侧前肢跨步数无显著差异(P>0.05);L-DOPA组大鼠治疗后毁损对侧前肢跨步数较治疗前均显著增加(P<0.01),但随着治疗时间延长,毁损对侧前肢跨步数改善程度有所减弱;MPEP+L-DOPA组大鼠治疗后损毁对侧前肢跨步数较治疗前均显著增加(P<0.01),且前肢功能改善程度不随时间延长而减弱;在治疗的第9、11、18、21天,MPEP组大鼠治疗后毁损对侧前肢跨步数较治疗前均显著增加(P<0.05)。2.在21天治疗过程中,生理盐水组和MPEP组PD大鼠始终未出现AIM行为;与L-DOPA组相比,MPEP+L-DOPA组大鼠在治疗的第18、21天,肢体AIM评分显著减少(P<0.01);在治疗的第21天,口颌AIM、轴性AIM及总AIM评分显著减少(P<0.05)。3.在21天治疗过程中,生理盐水组和MPEP组PD大鼠均未出现对侧旋转;L-DOPA组大鼠治疗后的对侧旋转反应时间随着整个治疗时间的延长有所缩短(P<0.05);而MPEP+L-DOPA组大鼠的对侧旋转反应时间未出现随治疗时间延长而缩短。结论:1.mGlu R5拮抗剂MPEP单独应用能够改善PD运动症状;2.mGlu R5拮抗剂MPEP联合L-DOPA治疗能够改善PD运动障碍,改善L-DOPA导致的对侧旋转反应时间的减少;3.mGlu R5拮抗剂MPEP能够增强L-DOPA的抗PD效应且部分改善异动症。第二部分代谢型谷氨酸受体5及其拮抗剂MPEP对左旋多巴诱发异动症大鼠纹状体突触超微结构及突触后致密蛋白-95影响的研究目的:评价代谢型谷氨酸受体5及其拮抗剂MPEP对LID大鼠背侧纹状体突触超微结构及突触后致密蛋白-95的影响。方法:40只成功PD大鼠分四组治疗(生理盐水组、L-DOPA组、MPEP组、MPEP+L-DOPA组)(每组10只),分别持续治疗21天,于最后一次给药后麻醉处死,提取大鼠背侧纹状体组织,进行透射电镜制样并观察测量各组突触间隙宽度、穿孔性突触比率及突触后致密物厚度,Western blot检测突触后致密蛋白-95(PSD-95)蛋白表达。结果:1.与生理盐水组相比,L-DOPA组大鼠背侧纹状体穿孔性突触显著增多,所占比率显著增大,同时突触间隙显著变窄,PSD厚度显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05);MPEP联合L-DOPA治疗明显减少穿孔性突触比率和PSD厚度,突触间隙显著增宽,差异均有统计学意义(P<0.05);MPEP单独治疗组穿孔性突触比率显著减少,PSD厚度和突触间隙均显著变窄,差异均有统计学意义(P<0.05);2.与生理盐水组相比,L-DOPA组大鼠毁损侧纹状体区PSD-95蛋白表达水平较生理盐水组显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);而MPEP+L-DOPA组及MPEP组大鼠毁损侧纹状体区PSD-95蛋白表达水平较L-DOPA组显著下调(P<0.05)。结论:1.LID的发生发展与皮质纹状体突触活性增强密切相关;2.mGlu R5拮抗剂MPEP减弱了L-DOPA诱发异动症大鼠皮质纹状体突触活性的过度增强,该作用可能与突触后致密蛋白-95的异常表达相关。第三部分Ca MKII-CREB-BDNF信号通路在代谢型谷氨酸受体5影响左旋多巴诱发异动症突触可塑性中的作用机制研究目的:探讨Ca MKII-CREB-BDNF信号通路在代谢型谷氨酸受体5影响LID突触可塑性中的作用机制研究。方法:按随机数字表法选取50只成功PD大鼠,分五组治疗(生理盐水组、L-DOPA+生理盐水组、L-DOPA+Ca MKII抑制剂KN-93组、L-DOPA+anti-CREB组、L-DOPA+anti-BDNF组),每组10只,大鼠每日2次腹腔注射生理盐水或相应治疗药物,持续治疗23天。在给药治疗的第21、23天进行异常不自主运动(AIM)评分。于最后一次给药后麻醉处死,提取大鼠背侧纹状体组织,Western blot检测m Glu R5、P-Ca MKII/Ca MKII、P-CREB/CREB、BDNF蛋白表达。结果:1.与生理盐水组相比,L-DOPA组大鼠毁损侧纹状体区m Glu R5、P-Ca MKII、P-CREB及BDNF蛋白表达水平均显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05),而MPEP+L-DOPA治疗能够显著抑制m Glu R5、P-Ca MKII、P-CREB及BDNF蛋白表达(P<0.05);单独MPEP治疗组m Glu R5、P-Ca MKII、P-CREB及BDNF蛋白表达均显著降低(P<0.05);2.与生理盐水组相比,L-DOPA组大鼠毁损侧纹状体区m Glu R5、P-Ca MKII、P-CREB及BDNF蛋白表达水平均显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);KN-93组、anti-CREB组和anti-BDNF组m Glu R5蛋白表达较L-DOPA组均无统计学意义(P>0.05);KN-93组P-Ca MKII的表达较L-DOPA组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),而anti-CREB组和anti-BDNF组P-Ca MKII表达较KN-93组显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),但较L-DOPA组P-Ca MKII表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);KN-93组和anti-CREB组P-CREB的表达较L-DOPA组均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),而anti-BDNF组P-CREB的表达较KN-93组和anti-CREB组显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);KN-93组、anti-CREB组和anti-BDNF组BDNF的表达较L-DOPA组均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.Ca MKII-CREB-BDNF信号通路参与了LID皮质纹状体突触可塑性变化;2.m Glu R5通过Ca MKII-CREB-BDNF信号通路影响皮质纹状体突触可塑性而引起LID。