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目的:从透射电镜的角度观察中药芪参还五胶囊对大鼠失神经支配后的骨骼肌运动终板变性的影响。
方法:实验分组情况为:选取雄性成年Sprague-Dawley大鼠40只,按随机数字表法平均分为实验组与对照组各20只:实验组灌服中药芪参还五胶囊生理盐水溶液,3.0g生药/ml,1ml/100g体重,每日一次;对照组生理盐水灌胃组,生理盐水1ml/100g体重,每日一次。分别设立造模后1天、3天、1周、2周、4周末亚组。各亚组于造模后当日灌胃,至取材当日为止。造模:无菌操作下,于臀肌间隙分离进入,暴露梨状肌及其下的坐骨神经后,于梨状肌下缘0.8cm处切除约1cm坐骨神经,远近端翻转180°,分别进行固定,阻止神经间的自然生长。电镜切片的制作:选左下肢为实验侧,腹部皮肤2%碘伏液消毒后,10%水合氯醛腹腔注射麻醉。造模后1天、3天、1周、2周、4周末亚组大鼠分别于左下肢后侧纵切口切取腓肠肌中上段神经入肌点处肌组织约9mm3,经4%戊二醛固定、脱水、树脂包埋、半包定位、甲苯胺蓝染色、超薄切片、铀-铅双重电子染色。
结果:造模1天亚组大鼠行走困难,左侧肢体跛行,透射电镜切片见终板突触后区域正常,突触后膜皱褶明显,分级清晰易辨,突触间隙正常,轴突内线粒体发生肿胀,突触小泡开始聚集,轴突终末脱离突触后膜,初级间隙宽度增加并且变得不均匀,治疗组与对照组大鼠活动及电镜显示无差别;造模3天亚组大鼠行走跛行状况缓解,左侧行走无力。透射电镜切片见终板突触后区域变宽,初级皱褶和次级皱褶变浅,突触间隙变宽,轴突内线粒体进一步肿胀,实验组与对照组无明显差别;造模1周亚组实验组大鼠行走跛行无力,肌萎缩。电镜下见运动终板萎缩,初级皱褶和次级皱褶未继续变浅,线粒体无空泡变性;对照组大鼠行走状况同实验组,处置侧肌萎缩重于实验组。电镜下见运动终板萎缩,初级皱褶和次级皱褶扭曲导致次级突触间隙变宽,线粒体空泡变性;造模2周亚组实验组大鼠仍可见行走跛行无力。电镜显示运动终板萎缩,初级皱褶和次级皱褶扭曲导致次级突触间隙变宽,线粒体空泡变性,对照组大鼠行走状况同实验组,处置侧肌萎缩重于实验组。电镜下可见运动终板突触后区域简单化,次级皱褶局部消失,突触间隙继续增宽;造模4周亚组实验组大鼠跛行仍存在。电镜显示运动终板突触后区域简单化,次级皱褶局消失,突触间隙略继续增宽,对照组大鼠行走跛行及肌萎缩状况同实验组。电镜观察运动终板结构严重破坏,以至不能辩认,剩余运动终板初级皱褶扁平,次级皱褶消失。
结论:造模1天、3天末时,芪参还五胶囊对大鼠失神经支配后的运动终板无明显保护和预防变性的效果。1、2周末时产生了明显的针对肌萎缩及运动终板超微结构的保护和预防变性作用。4周末时对大鼠失神经支配后的肌萎缩及运动终板的保护和预防变性作用已非常微弱,几乎消失。该实验表明中药芪参还五胶囊在一定时限内对失神经支配后的运动终板产生了保护和延缓损伤作用。