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研究目的:活性氧自由基等因素能够促使机体产生不可逆转的衰老,随着人口老龄化速度的加快,急需对应的解决策略与方法。中药具有鲜明的特色,对其研究有助于挖掘中医药文化,对中医药现代化具有重要意义。已有大部分研究以细胞和小鼠等作为模型来研究中药,而且证明了中药多糖具有良好的抗衰老活性。本文以秀丽线虫（Caenorhabditis elegans）为模式生物,选取以熟地黄、黄芪、桑葚、墨旱莲和何首乌等补虚中药为主的复方来研究中药的抗衰老活性,从复方整体到其中的主要成分,多层次解析了复方中药的抗衰老功能和理化属性,有望给中医药现代化研究提供更多的理论依据。研究方法:1.分别给秀丽线虫喂食浓度为0.25、0.5、1、2、4、8 mg/mL的编号为AS1323的复方汤剂,检测秀丽线虫的寿命。2.首先使用乙醇沉淀复方汤剂的多糖部位,再依次使用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇对复方汤剂萃取分离,然后检测各个萃取部位对秀丽线虫寿命的影响。3.分别提取分离复方的主要中药熟地黄、黄芪、桑葚、墨旱莲和何首乌的多糖部位,再检测各个多糖部位对秀丽线虫寿命的影响。4.分别给秀丽线虫喂食各种浓度的复方汤剂以及提取的各个多糖部位,3 d后,加入500μM胡桃醌进行氧化胁迫,检测秀丽线虫的存活时间。测定各个多糖部位的DPPH自由基清除率、ABTS自由基清除率和金属鳌合活性。给经过同步化处理的秀丽线虫喂食特定浓度的复方和各个多糖部位,10 d后,加入80μM荧光探针DCFH-DA,检测秀丽线虫体内的活性氧水平。5.检测复方和各个多糖部位对秀丽线虫行为和生殖发育的影响。给L1期秀丽线虫喂食特定浓度的药物,连续5 d测定培养液的OD570值,检测秀丽线虫对食物的消耗速率。同步化处理秀丽线虫得到虫卵,计数,加入特定浓度的药物,2 d后计数孵化成功的秀丽线虫,再计算卵孵化率。给L1期秀丽线虫喂食特定浓度的药物,每隔24 h利用计算机测定一次秀丽线虫的体长,共测定四次,对比秀丽线虫的体长。6.采用苯酚浓硫酸法测定多糖样品的总糖含量,BCA试剂盒测定蛋白质含量。采用薄层色谱法检测原始复方的主要化学成分。通过测定红外光谱,分析各个多糖含有的官能团情况,扫描波数范围为4000～400 cm-1,分辨率为4 cm-1。采用气相色谱法测定各个多糖的单糖组成,DB-5型毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25μm）,氢焰离子化检测器（FID）,氮载气流速0.9 mL/min,分离比20:1,肌醇内标。研究结果:1.原始复方具有抗衰老的潜在作用,当其浓度为2mg/mL时,秀丽线虫的平均寿命提高了16%（P=0.0002）。2.对复方汤剂进行萃取分离,得到多糖部位、石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、氨洗涤部位和剩余水部位等6个部位,其中多糖部位表现出一定的寿命延长作用,当浓度为8 mg/mL时,多糖部位对秀丽线虫的平均寿命提高了约10%（P=0.0013）。3.复方主要中药的多糖部位均有明显的延缓秀丽线虫衰老的作用,最佳浓度分别为熟地黄多糖1 mg/mL、黄芪多糖0.25 mg/mL、桑葚多糖0.25 mg/mL、墨旱莲多糖1 mg/mL和何首乌多糖0.25 mg/mL。4.在体内抗氧化实验中,复方多糖部位在浓度为8 mg/mL时显著延长秀丽线虫氧化模型的存活时间;熟地黄多糖在浓度为2 mg/mL时效果更佳;黄芪多糖没有改善作用,反而加快线虫死亡;4 mg/mL的桑葚多糖在前一个小时效果明显;浓度大于或等于2 mg/mL的墨旱莲多糖改善作用明显。何首乌多糖在浓度为8 mg/mL时能够改善线虫的存活。在体外抗氧化实验中,各个样品均表现出良好的抗氧化效果。另外,各个样品均能降低衰老秀丽线虫体内的ROS荧光强度。5.各个样品对秀丽线虫的摄食行为、虫卵孵化率和体型发育均没有明显的影响。复方多糖组的秀丽线虫体长在第24 h时比空白对照减少55%,48 h后减少50%,72 h后减少29%,然而在第96 h增加0.86%,恢复正常。6.复方多糖、熟地黄多糖、黄芪多糖、桑椹多糖、墨旱莲多糖和何首乌多糖的提取率分别为8.6%、7.0%、3.7%、3.9%、2.2%和1.3%。红外光谱显示各个多糖均具有多糖光谱的基本特征。气相色谱分析显示复方多糖由7种单糖组成,分别为阿拉伯糖（Ara）、鼠李糖（Rha）、半乳糖醛酸（GalA）、葡萄糖醛酸（GlcA）、甘露糖（Man）、半乳糖（Gal）和葡萄糖（Glc）,比例为5.1:0.2:8.2:6.6:12.4:30.7:36.9。研究结论:本文从抗衰老活性入手,以秀丽线虫为模型,研究了复方中药的抗衰老作用。结果显示,以熟地黄、黄芪、桑葚、墨旱莲和何首乌等中药为主的复方能够延缓秀丽线虫的衰老,而且没有明显降低秀丽线虫的生存质量,复方的此种功效可能源于其中的多糖成分协同降低了生物体内的活性氧水平。