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B淋巴细胞刺激因子(BLyS)对B细胞的平衡和免疫球蛋白的分泌具有重要的作用。BLyS行使相应的功能是通过和其三个受体的结合来实现的,经过一系列信号传递,实现基因的表达与调控。研究发现BLyS的过度表达会引起一系列的自身免疫疾病如系统性红斑狼疮、风湿性关节炎和干燥综合征等。所以,以BLyS为靶点阻断或减弱BLyS的活性来治疗自身免疫疾病成为了新的研究热点。我们前期通过计算机辅助设计的方法获得了BLyS拮抗肽BC、TA,并将其和人IgG1 Fc片段连接来维持结构的稳定性,形成融合蛋白BC-Fc、TA-Fc。同时构建了BC-Fc的优化融合蛋白BP-Fc(BC-Fc无His标签)、3-BC-Fc(三个拷贝的BC和Fc连接)。另外,我们将噬菌体库筛选的BLyS拮抗肽814和Fc连接形成814-Fc融合蛋白。本论文中,在之前研究的基础上对上述融合蛋白进行活性比较和位点分析;利用基因工程技术构建了新的融合基因pET30a-814-TA-Fc和pET30a-814-BC-Fc,原核系统表达融合蛋白,纯化后进一步对其进行活性分析;构建了BLyS突变基因并对表达的突变体蛋白活性进行了初步的检测。具体研究结果如下:1.纯化了BC-Fc、BP-Fc、3-BC-Fc和814-Fc融合蛋白,直接ELISA比较这些蛋白活性的结果显示,结合BLyS活性814-Fc最好,3-BC-Fc、BP-Fc、BC-Fc依次次之;竞争ELISA结果显示,竞争活性814-Fc最好,BC-Fc、3-BC-Fc、BPFc依次次之。2.814肽和BP-Fc融合蛋白竞争结合BLyS结果显示,肽BC和814具有相同的BLyS结合位点,但是具有不同的空间结合方向。3.构建并得到了序列完全正确的pET30a-814-TA-Fc和pET30a-814-BC-Fc重组载体,利用Protein A柱纯化得到了融合蛋白,ELISA结果显示814-TA-Fc和814-BC-Fc均能够结合BLyS,但结合活性低于814-Fc。4.分析并突变BLyS结合受体位点的关键氨基酸,重叠PCR的方法获得突变基因BLyS M,纯化获得BLyS M蛋白,ELISA结果显示其活性低于BLyS,获得低活性的BLyS突变体。