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目的:通过比较分析和探讨研究结核杆菌泛素样蛋白(Pup)-蛋白酶体系统(包括Pup基因、Mpa基因、Dop基因、Paf A基因)分别在新疆地区流行的结核杆菌药物敏感菌株(不耐药菌株)、单纯耐一线抗结核药物(利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇)的结核杆菌临床分离株、耐多药的结核杆菌临床分离株中缺失突变对其耐药性产生的影响。方法:以利用SOE-PCR技术和T载体构建及鉴定各基因置换型缺失突变载体;利用电穿孔技术将各缺失突变载体分别电转化至不同耐药结核杆菌菌株,并鉴定;利用刃天青显色法快速检测各组结核杆菌菌株最小抑菌浓度(MIC),比较分析和探讨结核杆菌Pup-蛋白酶体系统基因缺失突变对其耐药性产生的的影响。结果:1.成功构建了结核杆菌Pup-蛋白酶体系统(包括Pup基因、Mpa基因、Dop基因、Paf A基因)基因置换型缺失突变载体T-Pup-N-K-Pup-C、T-Mpa-N-K-Mpa-C、T-Dop-N-K-Dop-C和T-Paf A-N-K-Paf A-C;2.成功构建了Pup基因缺失突变株:INH-MTB△Pup、RFP-MTB△Pup、SM-MTB△Pup、EB-MTB△Pup、MDR-MTB△Pup和Drug-sensitive-MTB△Pup,Mpa基因缺失突变株:INH-MTB△Mpa、RFP-MTB△Mpa、SM-MTB△Mpa、EB-MTB△Mpa、MDR-MTB△Mpa和Drug-sensitive-MTB△Mpa,Dop基因缺失突变株:INH-MTB△Dop、RFP-MTB△Dop、SM-MTB△Dop、EB-MTB△Dop、MDR-MTB△Dop和Drug-sensitive-MTB△Dop,Paf A基因缺失突变株:INH-MTB△Paf A、RFP-MTB△Paf A、SM-MTB△Paf A、EB-MTB△Paf A、MDR-MTB△Paf A和Drug-sensitive-MTB△Paf A;3.刃天青显色法测定了各组结核杆菌菌株的MIC,结果显示:与原始耐药结核杆菌菌株相比,单纯耐一线抗结核药物和耐多药的结核杆菌临床分离株Pup基因、Mpa基因和Dop基因缺失突变后,其MIC均出现不同程度下降,以Pup基因缺失株最为明显;单纯耐一线抗结核药物和耐多药的结核杆菌临床分离株Paf A基因缺失突变后,其MIC基本无变化;结核杆菌药物敏感菌株Pup基因、Mpa基因、Dop基因和Paf A基因缺失突变后,MIC基本无变化。结论:结核杆菌Pup-蛋白酶体系统Pup基因、Mpa基因和Dop基因缺失突变可使新疆地区流行的单纯耐一线抗结核药物(异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇)的结核杆菌临床分离株和耐多药结核杆菌临床分离株的耐药性出现不同程度降低,Pup基因缺失株下降最为明显,几乎丧失了耐药性;Paf A基因缺失株耐药性基本无变化,这说明结核杆菌耐药性与结核杆菌Pup-蛋白酶体系统Mpa基因、Dop基因具有相关性,与Pup基因密切相关,这为进一步研究结核杆菌Pup-蛋白酶体系统对结核杆菌耐药性的调控作用机制奠定了基础。