研究目的:本研究通过检测乙醛脱氢酶蛋白（ALDH）在人舌癌Tca8113细胞系中的表达水平,并对其三种细胞亚型(ALDH^hi细胞、ALDH^lo细胞及未分选的Tca8113细胞)的生物学行为进行比较,结合临床研究人舌癌病理标本中ALDH1A1蛋白表达水平与患者临床因素的相关性,旨在为ALDH作为人舌癌肿瘤干细胞标志的可行性提供理论研究依据。研究方法:1、应用单克隆实验研究单个原代Tca8113细胞的体外存活能力;细胞免疫荧光实验检测ALDH在人舌癌细胞系Tca8113细胞中的表达;应用流式细胞仪检测经ALDHFLUOR法染色后的原代Tca8113细胞ALDH阳性率;应用流式细胞仪依据ALDH细胞内表达水平分选出ALDH^hi、ALDH^lo细胞亚群,应用CCK-8法检测2个细胞亚群和未分选细胞的体外增殖能力差异,Transwell实验检测3组细胞的体外侵袭能力差异,通过裸鼠成瘤实验观察3组肿瘤细胞亚群成瘤能力的差异;2、应用CCK-8法检测分选后的ALDH^hi细胞、ALDH^lo细胞及未分选Tca8113三种细胞对四种常用化疗药物顺铂、长春新碱、紫杉醇、5-FU的敏感性差异;3、随机选取2006年1月到2016年1月期间于我院经手术切除的人舌鳞状细胞癌石蜡标本50例及淋巴结标本31例,应用免疫组化染色法检测ALDH1A1在上述组织中的表达,并分析其表达水平与各临床指标间的关系。研究结果:1、单细胞培养120 h后,有49.59%的细胞存活,在不置换培养液的条件下,接种12 d后仍有细胞存活,提示这部分细胞具有较强增殖存活能力,其中可能存在肿瘤干细胞;免疫荧光实验显示ALDH主要表达于细胞质,仅有极少数表达于细胞核,根据其荧光强弱不同可区分出ALDH^hi与ALDH^lo细胞;流式细胞仪检测ALDH^hi细胞比率为5.21%;细胞体外增殖实验显示3组细胞体外增殖能力从高到低依次排序为ALDH^hi细胞、未分选Tca8113原代细胞、ALDH^lo细胞;Transwell实验结果显示ALDH^hi细胞跨膜细胞数为84.13±31.75,ADLHlo细胞跨膜细胞数为56.57±19.37,未分选细胞跨膜细胞数为73.93±28.42,ALDH^hi细胞侵袭能力高于ALDH^lo及未分选细胞(P<0.05﹚;ALDH^hi细胞所有浓度组均可成瘤、ALDH^lo细胞仅在1×106浓度组有1只成瘤,未分选Tca8113细胞1×106浓度组全部成瘤,1×105浓度组有1只成瘤,1×104浓度组无明显成瘤。所有成瘤组瘤体大小无显著差别（P>0.05）。2、通过方差分析及LSD两两比较可见3种舌癌细胞亚群对4种药物的耐药性由高到低依次为ALDH^hi细胞、未分选Tca8113原代细胞、ALDH^lo细胞（P﹤0.05）,未分选Tca8113细胞对化疗药物的敏感性由高到低依次为长春新碱、紫杉醇、顺铂、5-FU,ALDH^hi细胞（P=0.343）、ALDH^lo细胞（P=0.181）对长春新碱、紫杉醇的敏感性无显著性差异（P>0.05）。3、免疫组化结果显示,ALDH1A1主要表达于细胞质,其在人舌鳞状细胞癌原发灶标本中的表达水平较高,50例病灶标本中ALDH1A1的阳性表达率为58%。ALDH1A1表达水平与患者的临床分期（P=0.038）、有无淋巴结转移（P=0.003）、病灶大小（P=0.021）及组织学分级（P=0.019）具有相关性,呈正相关关系(P<0.05﹚,与患者的性别（P=0.413）、年龄（P=0.441）及吸烟量（P=0.126）无显著相关性（P>0.05）;淋巴细胞内基本不表达ALDH1A1,在转移淋巴结中ALDH1A1主要表达于癌巢细胞胞浆,ALDH1A1表达水平与患者的临床分期（P=0.001）、有无淋巴结转移（P=0.000）及病灶大小（P=0.001）具有相关性,呈正相关关系(P<0.05﹚,与患者的性别（P=0.422）、年龄（P=0.975）、吸烟量（P=0.658）及组织学分级（P=0.786）无显著相关性（P>0.05）。结论:1、人舌癌Tca8113细胞系中的ALDH^hi亚群具有较强的体外增殖能力、侵袭能力及成瘤能力,具有类肿瘤干细胞性质,在细胞系中数量占极低比例;2、ALDH^hi细胞具有较强的耐药性,肿瘤细胞的耐药能力可能与细胞内醛脱氢酶含量有关;3、ALDH1A1蛋白表达水平与患者病灶大小、临床分期、淋巴结转移、组织学分级有关,其高水平表达可能提示不良预后;4、依据本实验结果,可以初步判定ALDH具有成为人舌癌肿瘤干细胞标志物的潜能。