马疱疹病毒Ⅰ型（Equine herpes virus type 1,EHV-1）能导致马属动物急性呼吸道感染、神经型瘫痪和怀孕母马流产,对养马业造成巨大经济损失,被世界卫生组织列为法定报告传染病,也被我国列为二类动物疫病。马疱疹病毒及其它疱疹病毒的囊膜化过程比较复杂。到目前为止,疱疹病毒二级囊膜化过程（Secondary envelopment）还存在争议,阻碍了抗疱疹病毒药物及有效疫苗的研制。因此,研究病毒囊膜蛋白在二级囊膜化过程中的作用,对了解病毒二级囊膜化机制有重要意义。本文通过对EHV-1 gD囊膜蛋白驻留高尔基体的关键功能区进行鉴定,以期为研究囊膜蛋白在EHV-1二级囊膜形成过程中的作用提供理论依据。利用生物信息学软件对同源蛋白EHV-1 gD(gDEHV-1)和HSV-1 gD(gDHSV-1)的理化性质、二级结构、三级结构及翻译后修饰等特性进行生物信息学预测和分析,并以gDEHV-1与gDHSV-1基因为模板,运用基因工程技术构建一系列gD蛋白单功能区、双功能区及三功能区替换的嵌合质粒。质粒经测序核实无误后转染至BHK-21细胞中,利用Western blot实验验证目的蛋白的表达,并通过激光共聚焦显微镜观察14个重组蛋白的亚细胞定位情况,最终鉴定出EHV-1 gD囊膜蛋白高尔基体驻留的关键功能区。生物信息学结果表明,gDEHV-1与gDHSV-1均为Ⅰ型跨膜蛋白,其分子量分别约为45 k Da和43 k Da。二者具有类似功能的结构域,依次为信号肽（Signal peptide,SP）、胞外结构域（Extracellular domain,ECD）、跨膜区（Transmembrane domain,TM）及胞质结构域（Cytosolic domain,CT）。经菌液PCR鉴定和测序核实,本实验成功构建了14个不同功能区替换的嵌合型质粒;经Western blot实验验证,构建的14个嵌合质粒在100 Kda附近检测到目的条带,表明其都可在BHK-21细胞内正常表达。亚细胞定位结果表明,具有（TM-CT）EHV-1功能区的融合蛋白绝大多数驻留于高尔基体;gDEHV-1的TM/CT/TM-CT被替换的融合蛋白更易滞留于内质网。本实验通过基因工程技术和同源功能区替换的方法,成功构建了14个杂合质粒,其都能在BHK-21细胞内正常表达,并鉴定出（TM-CT）EHV-1是EHV-1 gD囊膜蛋白高尔基体驻留的关键功能区。本研究结果为研究EHV-1 gD囊膜蛋白驻留高尔基体的分子机制奠定试验依据,有望为研究疱疹病毒二级囊膜的形成机制提供理论基础。