【摘 要】
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目的:肝移植是终末期肝衰竭最有效的治疗手段之一,但存在供肝短缺的限制,三维生物打印技术的发展有望解决这一限制。通过生物打印,生物墨水包裹细胞组装成类肝器官,产生细胞-基质间连接来调控细胞功能,因此生物墨水的性质对类器官生物学功能具有重要影响。甲基丙烯酸酐化明胶（gelatin methacryloyl,Gel MA）为天然材料,常用于构建结构复杂的类肝器官,但其缺乏肝脏特异的生化大分子,无法较好模
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目的:肝移植是终末期肝衰竭最有效的治疗手段之一,但存在供肝短缺的限制,三维生物打印技术的发展有望解决这一限制。通过生物打印,生物墨水包裹细胞组装成类肝器官,产生细胞-基质间连接来调控细胞功能,因此生物墨水的性质对类器官生物学功能具有重要影响。甲基丙烯酸酐化明胶（gelatin methacryloyl,Gel MA）为天然材料,常用于构建结构复杂的类肝器官,但其缺乏肝脏特异的生化大分子,无法较好模拟肝细胞天然生存环境,而肝脏去细胞支架（decellularized liver scaffold,DLS）保留有富含生物活性物质的细胞外基质（extracellular matrix,ECM）成分,因此在Gel MA中加入DLS衍生的可溶性ECM有望改善其肝组织特异的生物相容性。然而DLS制备成生物墨水过程对ECM具有破坏作用,需建立一套适宜、温和的可溶性ECM生物墨水制作方案。方法:本研究采用1%Triton+0.1%十二烷基硫酸钠钠（sodium dodecyl sulfate,SDS）灌流法获取大鼠DLS,再通过洗涤、消化和冻干制成可溶性ECM后对鉴定生化成分,并探讨其对人肝细胞系L-O2的影响。结果:DLS外观呈半透明状,台盼蓝沿门脉注射后可见完整的血管结构,组织学染色和扫描电镜未见细胞核;DNA定量检测显示,每mg干重DLS残留的DNA含量为32.98±6.68ng,显著低于正常肝组织（P<0.05）;此外,可溶性肝脏ECM保留了胶原蛋白、糖胺聚糖、肝细胞生长因子和碱性成纤维生长因子等;死/活染色和Alamarblue细胞活力检测显示,Gel MA水凝胶中加入肝脏可溶性ECM可改善L-O2的细胞活力水平,且L-O2的细胞活力水平与水凝胶内ECM含量呈正比。结论 1%Triton+0.1%SDS在完全去除肝脏细胞成分的同时保存了血管结构和ECM成分。此外通过洗涤、消化和冻干获取的可溶性ECM较好地保留了生物活性物质,并可改善Gel MA的生物相容性,这说明我们成功构建了适宜的肝脏可溶性ECM墨水制备方案,可为肝脏生物打印材料的研究提供指导。
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