乳源性生物活性小肽的巨噬细胞免疫功能特性研究

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瑞士乳杆菌是制作发酵型牛乳或牛乳制品常用的一种乳杆菌,近年来发酵乳中活性成分的研究一直深受食品界的青睐,其中活性小肽的研究尤为热门。本文通过研究瑞士乳杆菌发酵乳来源的生物活性小肽对BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞的免疫调节作用,评价其作为功能性食品成分的潜在价值,并对其作用机理做出初步探究,主要包括以下研究内容:(1)采用MTT实验、中性红吞噬实验、一氧化氮分泌量测定实验等方法,从已知序列的4种瑞士乳杆菌LH0906发酵乳来源的小肽QEPVL、DELQ、LPLP和GLPN中筛选出了具有巨噬细胞免疫调节活性的小肽GLPN。(2)采用ELISA法检测GLPN对巨噬细胞TNF-α、IL-1β、IL-6的细胞因子水平的影响,对具有的免疫促进作用效果进行了评估。结果表明,GLPN在0.1mg/mL浓度下所有指标上都能表现出显著的促进作用,而在LPS作用下,GLPN浓度达到0.5mg/mL也未引起炎症因子的过量表达。(3)通过对小肽序列中氨基酸残基的逐个替换和两端去除的方法,设计并合成了目标小肽的结构类似肽,通过MTT实验和一氧化氮分泌量测定实验,比较小肽与其结构类似肽之间的差异,分析小肽作用效果与序列之间的关系,发现在促巨噬细胞增殖方面,GLPN序列上的氨基酸残基均不能替换。在促进巨噬细胞分泌一氧化氮方面,N端的甘氨酸,第二位的亮氨酸相对其他氨基酸残基起到更多的作用。
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