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目的:基因异常甲基化在多种疾病发生发展机制中有着重要的作用。本研究旨在探讨miR-200b发生甲基化程度不同及其表达量的差异对于胃癌细胞MGC-803、BGC-823增殖、侵袭、凋亡及对上皮间质转化作用的影响。方法:本研究以正常人胃粘膜上皮细胞(GES-1)和胃癌细胞(MGC-803、BGC-823)为研究对象,miR-200b为研究指标。首先提取正常未处理人正常胃粘膜上皮细胞GES-1及胃癌MGC-803、BGC-823细胞总RNA,逆转录之后进行实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测miR-200b在三种细胞中表达的差别,而miR-200b启动子区甲基化水平通过亚硫酸氢钠修饰的PCR(BSP)法进行检测。其次,对MGC-803、BGC-823细胞进行不同浓度和不同时间点的去甲基化处理,即使用浓度为2.5、5.0、7.5、10μM的5氮杂胞苷(5’-Aza-CdR)处理细胞,每24h换液一次作用72小时后,用RT-PCR法检测miR-200b的表达量变化,BSP法检测miR-200b启动子区甲基化水平的差异。根据表达量的差异及甲基化的程度选择合适的药物处理浓度。最后,使用最合适的药物浓度(10μM)作用MGC-803、BGC-823细胞72h,transwell实验检测细胞侵袭能力,流式细胞计术检测细胞周期及凋亡的情况。Western Blot检测受miR-200b表达量差异影响的上皮间质转化(EMT)相关指标的变化。结果:正常胃粘膜上皮细胞(GES-1)中miR-200b的表达量较高于胃癌细胞MGC-803、BGC-823,差异有统计学意义(P<0.05)。而miR-200b启动子区甲基化水平则与之相反,MGC-803、BGC-823细胞系均较高于GES-1,差异有统计学意义(P<0.05)。选用不同浓度5’-Aza-CdR药物处理细胞,两种胃癌细胞系miR-200b的表达量有随着药物浓度逐渐升高的趋势,而浓度为10μM时miR-200b启动子区甲基化水平较空白对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell实验表明,处理组的胃癌细胞其侵袭能力较对照组明显减弱(P<0.05)。流式细胞术表明实验组较对照组细胞周期进展减慢,主要停留在G1期而S期细胞数相对减少(P<0.01)。与对照组相比实验组细胞晚期凋亡数量稍稍增多,差异有统计学意义(P<0.05)。Western Blot实验表明,在表皮粘膜细胞中表达量较高的E-cadherin实验组较对照组表达量升高,而在间质细胞中表达量较高的N-cadherin,ZEB1,Slug,MMP9实验组较对照组表达量降低,即实验组细胞上皮间质转化(EMT)程度降低。结论:MiR-200b表达的下降可能在胃癌变过程中起到重要作用,其作用机制可能与miR-200b启动子区高度甲基化作用有关。miR-200b启动子区存在发生甲基化的位点并且甲基化程度的不同可以影响其表达量,而miR-200b表达量的差异又与胃癌细胞MGC-803、BGC-823增殖、侵袭能力密切相关。所以抑癌基因启动子区发生异常甲基化,在胃癌发生、发展及预后研究中有重要作用和深远影响。