目的:本实验通过检测除急性早幼粒细胞白血病(APL/M3)外的急性髓细胞白血病(AML)患者骨髓单个核细胞中RNA诱导沉默复合体(RISC)相关蛋白AGO2和TNRC6A的mRNA表达水平,在不同层面分组后比较AGO2和TNRC6A的mRNA相对表达量差异,分析AGO2和TNRC6A的表达水平与急性髓细胞白血病各临床指标之间可能存在的联系;同时检测体外培养的白血病细胞系(THP1、KG1a、K562)中AGO2的mRNA表达水平,进一步证实AGO2 mRNA的表达量在白血病与正常人之间的差异,据此推断AGO2以及TNRC6A蛋白在AML的发生发展中可能存在的作用以及RNA诱导的基因调节与AML的发生、发展、治疗等可能存在的关系,为探索AML新的发病机制和新的治疗靶点等多方面提供新的思路。方法:1、收集92例AML(除M3外)患者骨髓标本及20例正常人骨髓标本(AML标本中82例为初治患者骨髓标本,10例为上述患者中的10名患者经一疗程化疗后的骨髓标本),采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测骨髓单个核细胞内AGO2、TNRC6A蛋白mRNA的表达水平,使用2-△△ct法计算各个标本AGO2、TNRC6A mRNA的相对表达量。同时收集上述患者的临床资料,将患者按性别、年龄、诊断分类、危险度分级、治疗后缓解情况等多种临床特征进行分组,分别比较AGO2以及TNRC6AmRNA在各组间相对表达量的差异。2、体外培养THP1、KG1a以及K562三种白血病细胞系,分别在细胞生长状态良好时收集细胞并进行RNA的提取(提取健康成人外周血单个核细胞RNA作为对照),采用RT-PCR技术检测上述三种白血病细胞以及正常人外周血单个核细胞中AGO2蛋白mRNA的表达水平,使用2-△△ct法计算各组细胞中AGO2 mRNA相对表达量,比较三种白血病细胞和正常人单个核细胞AGO2蛋白mRNA的表达差异,进一步探讨AGO2蛋白与白血病之间可能存在的关系。结果:1、AGO2和TNRC6A mRNA在AML患者中的表达情况:1)AML患者中二者的表达均明显高于正常对照组;2)高危组患者中二者的表达均高于低危患者;3)高白组(白细胞大于100*10^9)患者中二者表达均高于非高白组(白细胞小于100*10^9);4)预后不良染色体核型组中二者表达均高于良好染色体核型组,ago2mrna在预后不良染色体核型组表达还高于预后中等染色体核型组;5)预后基因分组中,单独flt3-itd阳性组二者的表达均高于预后基因阴性组,nmp1阳性或(和)cebpa阳性组tnrc6amrna的表达高于预后基因阴性组;6)患者第一次化疗后二者表达水平均显著下降;7)未缓解组患者中二者的表达均高于完全缓解组及部分缓解组;8)按诊断分组并进行两两间比较,其中m6患者中ago2mrna表达高于m1患者,m1患者中tnrc6a表达高于m2患者;以上各组间比较差异均有统计学意义(p<0.05)。2、ago2和tnrc6amrna表达量之间的相关关系:二者的表达在正常对照组中无相关关系(person相关系数r=0.0275,p=0.936);二者在aml患者组中的表达具有正相关关系(person相关系数r=0.381,p=0.009)。3、ago2mrna在thp1、kg1a以及k562三种白血病细胞系中表达情况:三种细胞系中ago2mrna的表达均高于正常人单个核细胞,其中以k562相对表达量最高,kg1a次之,差异均具有统计学意义(p﹤0.05)。结论:1.ago2mrna及tnrc6amrna在aml患者中较正常对照组高表达,同时ago2mrna在体外培养的三种白血病细胞系中均较正常人高表达,高度提示rna诱导沉默复合体(risc)核心蛋白ago2及rna诱导的基因调节与aml之间可能存在密切关系。ago2mrna及tnrc6amrna分别在第一次化疗前组、高危组、高白细胞组、预后不良染色体核型组、不良分子学预后组等组内高表达,进一步说明ago2及tnrc6a表达升高可能与aml的发生发展过程及不良预后相关,预示rna诱导的基因调节在白血病的发生发展中可能有着重要的作用。ago2及tnrc6amrna在化疗后未缓解组高表达,提示二者可能与aml患者的耐药相关。ago2在m6患者中高表达,暗示其可能在m6的发生发展中有着独特的作用。tnrc6amrna同时在伴有良好预后基因组和伴不良预后基因组高表达,暗示其可能在aml的分子学改变中存在一定作用。2.AGO2 mRNA与TNRC6A mRNA的表达量在正常对照组无相关关系,而在AML患者组中具有正相关关系,预示着AGO2蛋白与TNRC6A蛋白在白血病的发展中可能存在协同作用,基于二者都是RISC的重要蛋白组分,进一步提示RNA诱导的基因调节在白血病的发生发展中可能有着重要的作用。