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脊髓损伤后截瘫病人的治疗是目前临床治疗中的重大课题，影响神经再生和有效修复的因素相当复杂，损伤区胶质瘢痕形成、神经营养因子缺乏、抑制轴突生长乃至妨碍轴突正确寻靶的抑制性分子的存在、促损伤基因的过度表达以及抗损伤基因和促轴突生长基因的表达不足等因素均能影响中枢神经再生。对脊髓损伤后修复研究的现状和趋势主要围绕以下几个方面：①促进诱导轴突的生长，如给予多种促进神经生长的神经营养因子或促进神经营养因子的表达、为再生的轴突提供桥梁及管道、提供能支持引导神经生长的雪旺氏细胞及细胞外基质成分。②消除抑制轴突生长的因素，这些抑制因素主要与中枢神经系统的髓磷脂及损伤后形成的空洞和胶质瘢痕有关。IN-1为髓磷脂相关生长阻逆蛋白抗体，目前国内外学着都倾向于其对抗相应抗原方面的研究，但其促进轴突生长是否还有其他的机制?为此，本实验从另一个角度出发，通过IN-1以及和NT-3联合作用，观察其是否会对即刻早期基因c—fos及c—jun的表达产生影响，并且从多个方面对脊髓损伤恢复程度进行评价。第一章IN-1及NT—3联合作用后c-fos及c-jun表达的变化目的：从基因及蛋白水平探讨脊髓损伤后给予IN-1以及和NT-3联合作用后c—fos及c—jun的表达有无变化。材料和方法：清洁型Sprague-Dawley（SD）大鼠240只，随机分为手术对照组（n=80）、IN-1组（n=80）及IN-1和NT-3组联合作用组（n=80）。每个组中大鼠按照手术后时间随机平均分为15min、30min、1h、2h、4h、6h、8h、12h 8个小组，每个小组10只。所有大鼠在相当于T8椎板水平用做好标记的显微剪刀剪断脊髓的背侧2／3。手术对照组、IN-1组和联合作用组在脊髓横断处头侧分别注入生理盐水、IN-1及IN-1和NT-3。所有大鼠在相应时间点处死，取出脊髓组织。其中5只用RT-PCR（reverse transcription-polymerase chain reaction）检测c—fos、c—jun基因的表达，另外5只用Western blot检测c-fos、c—jun蛋白的表达。利用图像分析后所得数据采用单因素方差分析进行统计学处理，P＜0.05结果有统计学差异。结果：1、脊髓损伤后c-fos mRNA及蛋白表达呈现先升高后下降的趋势，其中c-fos mRNA表达的高峰出现在脊髓损伤后1h，而c-fos蛋白表达的高峰晚于c-fos mRNA的表达，在脊髓损伤后4h。2、IN-1作用后，c-fos mRNA及蛋白表达下降，联合应用NT-3后下降更为明显，除15min时间点外各组之间相比有统计学意义（P＜0.05）。3、脊髓损伤后c-jun mRNA及蛋白表达也呈现先升高后下降的趋势，其中c-jun mRNA表达的高峰出现在脊髓损伤后4h，而c-jun蛋白表达的高峰晚于c-jun mRNA的表达，在脊髓损伤后6h。4、IN-1作用后，c-jun mRNh及蛋白表达升高，联合应用NT-3后升高更为明显，除15min、30min时间点外各组之间相比有统计学意义（P＜0.05）。结论：NT-3、IN-1作用机制之一可能通过抑制c-fos表达，促进c-jun表达对脊髓损伤起保护作用。第二章IN-1及NT-3联合作用后促轴突生长相关基因表达的变化目的：研究IN-1及联合应用NT-3后GAP-43、NGF、bFGF基因表达的变化。材料和方法：清洁型SD大鼠90只，随机分为手术对照组（n=30）、IN-1组（n=30）及IN-1和NT-3组联合作用组（n=30），每组又按照手术后时间随机平均分为1d、4d、7d、14d、21d和28d六个小组，每个小组5只。所有大鼠首先行蛛网膜下腔置管，然后在相当于T8椎板水平用做好标记的显微剪刀剪断脊髓的背侧2／3。其中手术对照组通过置管每天注入生理盐水30μl，而IN-1组每天用注入IN-1 24μl，IN-1和NT-3联合作用组，每天注入IN-1 24μl和NT-3 3μl，每天分为早、中、晚三次注射，最长持续1周。分别于相应时间点处死动物，用RT-PCR检测GAP-43、NGF、bFGF基因表达的变化，结果采用单因素方差分析进行统计学处理，P＜0.05结果有统计学差异。结果：1、脊髓损伤后GAP-43、NGF、bFGF mRNA的表达呈现先升高后降低的趋势，其表达的高峰分别在脊髓损伤后7d、14d、14d时间点；2、应用IN-1后三者mRNA的表达上调，联合应用NT-3后效果更加明显，各组相比有统计学意义（P＜0.05）。结论：IN-1以及联合应用NT-3后可能通过上调GAP-43、NGF、bFGF mRNA的表达，从而对脊髓损伤后轴突再生起一定的促进作用。第三章脊髓损伤后脊髓功能恢复的评价目的：从多个角度对给予IN-1及联合应用NT-3后脊髓功能恢复的情况进行评价。材料和方法：清洁型SD大鼠18只，随机分为手术对照组（n=6）、IN-1组（n=6）及IN-1和NT-3组联合作用组（n=6），动物模型的制作、给药途径及时间同第二章。但所有大鼠于术后14d时在右侧感觉运动皮层注射示踪剂BDA（biotin dextran amine）顺行示踪CST纤维。在手术前及手术后1d、1w、2w、3w及4w，采用BBB（Basso，Beattle，Bresnahan）评分评价运动功能，然后取出脊髓组织采用免疫组化染色观察神经元中丝蛋白（neurofilaments，NF）及胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillry acidic protein，GFAP）的表达、HE染色及BDA组织化学反应。结果采用单因素方差分析进行统计学处理，P＜0.05结果有统计学差异。结果：1、脊髓损伤后双后肢瘫痪，BBB评分，14d、21d和28d点联合作用组明显高于另外两组，有显著统计学差异（P＜0.05）；2、联合作用组NF染色平均灰度值明显小于其他两组，而GFAP染色明显大于其他两组，有显著统计学差异（P＜0.05）；3、脊髓损伤后联合作用组在损伤的尾侧可见再生的CST纤维，而IN-1组仅见纤维长入瘢痕组织，而未穿过，手术对照组则可在头侧见大量受阻的BDA染色阳性纤维。结论：IN-1及联合应用NT-3后可以促进脊髓损伤后轴突的再生，促进运动功能的恢复。小结本实验采用皮质脊髓束横断模型，探讨了IN-1以及联合应用NT-3后对即刻早期基因c-fos和c-jun mRNA及其蛋白表达的影响，并对二者的目的基因GAP-43、bFGF和NGF的表达进行了研究，最后从多个方面对脊髓恢复的情况进行了评价。结果显示：IN-1和NT-3抑制c-fos及其蛋白的表达，促进c-jun及其蛋白的表达，进一步促进了其目的基因GAP-43、bFGF和NGF的表达，从而促进了轴突再生和脊髓功能的恢复。本研究提供的证据表明：给予IN-1是治疗脊髓损伤很有效的方法，而联合应用NT-3后效果更加明显，其促进轴突生长的机制是多方面的。