Sf-1(Steroidogenic factor-1)是性腺发育、性别决定和肾上腺激素的调控所需要的核受体。目前在哺乳动物中对sf-1的研究发现其在内分泌组织如肾上腺、未分化的性腺形成和垂体的发育及类固醇激素的生成过程中都发挥着关键作用,是肾上腺和性腺发育的重要调控因子。在硬骨鱼类中关于sf-1的研究尚少见报道。在本实验研究中,根据我们实验室黄河鲤鱼性腺基因转录物组测序结果,获取黄河鲤鱼sf-1基因的全长cDNA序列,通过测序、blast和同源性比对来验证其序列的正确性。结构分析结果显示,sf-1基因具有7个外显子,其5′UTR长为197bp,3′UTR长为1624bp,开放阅读框(ORF)为1455bp,编码484个氨基酸。Sf-1蛋白质中包含一个N端锌指DNA结合域(DBD),一个配体结合域(LBD)。同源基因的序列比对表明黄河鲤鱼sf-1的氨基酸序列与斑马鱼、银鲫、青鳉的sf-1氨基酸序列具有高度的相似性,其相似性分别为92.2%、93.8%、75.2%,与哺乳动物和鸟类的相似性较低。采用MEGA6.0软件构建的系统演化树表明,黄河鲤鱼sf-1基因与斑马鱼、银鲫的sf-1基因归为一大支。由此推测黄河鲤鱼与斑马鱼、银鲫在进化上比较相似,表明它们的亲缘关系比较近。采用在线软件MatInspector对黄河鲤鱼sf-15’侧翼上游2000bp序列进行分析发现了与促进基因表达、性腺发育、性别决定与分化、类固醇激素的生成相关的转录因子的结合位点,显示出sf-1基因的功能可能与黄河鲤鱼性腺发育、类固醇激素的生成相关。染色体同线性分析显示sf-1在其它不同物种中都与ihx2、adgra2、nr6a1、olf2a基因紧密连锁,而在黄河鲤鱼中只找到与斑马鱼和人共有的保守基因psmb7,由此推测在黄河鲤sf-1基因所在区域发生了频繁的染色体重排,导致原有的一些保守基因丢失。通过荧光定量PCR(q RT-PCR)、胚胎整体原位杂交、组织原位杂交对sf-1在黄河鲤鱼胚胎以及两种性别的幼鱼和成鱼组织中的表达模式进行详尽分析,结果表明,sf-1在胚胎发生和成体各种组织中普遍表达,而在性腺、脑中表达水平较高。定位分析表达结果显示sf-1在卵巢发育中卵细胞的细胞质和卵巢颗粒细胞中表达;并且在睾丸中其表达的部位是精子细胞和支持细胞。实验室前期研究结果表明,miRNA在黄河鲤鱼早期性腺分化和发育中起着重要的作用,理论预测miR-181a是sf-1基因转录后的调控者。为了证实这种预测,我们把sf-13′端UTR野生型序列和经过改造的突变型序列分别克隆入双荧光素酶载体并与人工合成的miR-181a序列共同转化293T细胞,表明荧光强度显著降低;把miR-181a转化入离体培养的性腺细胞中,并进行ELISA和western blottig分析,结果显示sf-1蛋白含量显著降低。另外,我们还采用qRT-PCR技术分析了miR-181a和sf-1在成体和幼体不同组织以及在不同浓度的阿特拉津和来曲唑处理后这些组织中的表达变化情况,结果显示出二者之间存在负相关关系。以上结果说明miR-181a可以靶向调控sf-1而参与黄河鲤性腺分化和发育过程。