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目的:从成年C57BL/6小鼠分离、培养骨髓基质细胞,了解其生物学特性和体外向雪旺细胞样细胞分化的可能性。
方法:采用差速贴壁的方法分离、培养C57BL/6小鼠骨髓基质细胞,利用相差显微镜观察细胞生长情况。将骨髓基质细胞传代培养,用MTT法检测原代至传4代细胞的活力。并用流式细胞术检测传4代细胞的细胞周期及CD34、CD29、CD54、CDllb、CD90等表面抗原。经β-ME,RA,Forskolin,bFGF,PDGF,HRG体外诱导骨髓基质细胞后,利用流式细胞术检测S100阳性细胞率、实时定量PCR检测S100mRNA表达变化及荧光免疫细胞化学检测S100,硫苷脂04,MAG表达变化。将骨髓基质细胞与雪旺细胞共培养,采用荧光免疫细胞化学检测共培养后骨髓基质细胞S100表达变化。
结果(1)体外分离培养的骨髓基质细胞从原代至传4代细胞活力无差别;Go/G1、S、G2期的细胞所占百分比分别为85.76%、14.10%和0.15%,S+G2>10%;骨髓基质细胞CD34(-),CD29(+),CD54(+),CDllb(-),CD90(+)。(2)体外诱导前,小部分骨髓基质细胞表达S100蛋白。诱导后,骨髓基质细胞表达S100阳性细胞数增多,S100mRNA含量增多,S100蛋白表达量增多。未诱导的骨髓基质细胞不表达硫苷脂04抗原,诱导后骨髓基质细胞呈硫苷脂04阳性。体外诱导后MAG表达量下降。(3)与雪旺细胞体外共培养后,部分骨髓基质细胞S100蛋白表达量增多。
结论1、体外培养的骨髓基质细胞具有较强的增殖能力。2、体外诱导骨髓基质细胞能向雪旺细胞样细胞分化,S100表达量增多,呈硫苷脂04阳性,MAG表达量下降。3、与雪旺细胞体外共培养后,部分骨髓基质细胞S100蛋白表达量增多。