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本研究用化学诱变剂N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)诱变建立次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)缺陷型的HepG2细胞与Hela细胞系,并将其与人扁桃体淋巴细胞进行细胞融合,得到两种HGPRT缺陷型细胞和杂交细胞。对手术切除的扁桃体进行淋巴细胞分离,得到混合淋巴细胞,尼龙棉柱分离T、B淋巴细胞,并分别用E-花环法与ELISA法鉴定细胞。E-花环形成百分比为59.4%, ELISA鉴定出细胞表面CD23抗原浓度在30 pg/ml-60 pg/ml之间。由扁桃体分离得到的混合淋巴细胞显微镜下观察,细胞呈规则的圆型,且透亮,体外培养4-5天出现聚集生长现象。尼龙棉柱分离的T淋巴细胞、B淋巴细胞在外形上没有明显的差别。B淋巴细胞于体外培养第7天进入衰亡期,后便迅速死亡,第9天时全部死亡。T淋巴细胞可在体外连续培养20天,但随后也进入衰亡期,逐渐死亡。通过N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)诱导HepG2细胞与Hela细胞,逐步提高培养液中6-巯基鸟嘌呤(6-TG)的浓度,筛选出对6-TG有抗性的细胞株,检测它在HAT中生长的情况,得到可在含20μg/ml 6-TG的高糖DMEM完全培养基中稳定生长的细胞株,此细胞株在HAT培养基中第三天出现明显的死亡,第12天全部死亡,诱变后细胞的染色体分别分布于32-88、36-86,染色体众数分别为48、68。突变筛选出的细胞具有对6-TG抗性和对HAT敏感的特性,证实该细胞是HGPRT缺陷型细胞株,为以后进行杂交瘤制备提供了适宜的亲本细胞。将新鲜分离的人扁桃体淋巴细胞与处于对数生长期的HGPRT缺陷型HepG2细胞(HepG2-)和缺陷型Hela细胞(Hela-)在PEG的作用下分别进行融合,经过HAT选择培养基的筛选、克隆分别得到淋巴细胞-HepG2杂交细胞与淋巴细胞-Hela杂交细胞。杂交瘤细胞的获得使人淋巴细胞可以在体外长期培养,为体外产生人源性单克隆抗体的研究奠定了基础。