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第一部分对烟草中一种新的抗烟草花叶病毒的过敏反应的研究 过敏反应(hypersensitive response,HR)是病原物侵染抗性植株时所产生的快速的局部细胞死亡。在烟草上,抗性基因N和N介导了对烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus,TMV)的抗性。近来有报道在缺乏N和N的感病烟草上发现了一种新的不依赖N/N的HR反应(N/N-independent HR, NIHR)。我们利用在病毒外壳蛋白(coat protein,CP)C端融合表达外源肽的重组病毒在感病烟草Nicotiana tabacum cv.Samsun nn上诱导NIHR。我们发现NIHR和HR使植物细胞产生类似的组织化学反应并诱导了类似的防卫基因的表达。这表明NIHR和HR在生化和细胞水平可能具有相似性。然而,NIHR在Samsun NN上的激发比HR晚。在我们的重组病毒诱导的NIHR反应系统中,重组CP可能是NIHR的激发子。酵母双杂交显示,重组外壳蛋白CPFN20和CPSC1754与核糖体蛋白S29(ribosomal protein S29,RPS29)相互作用。在烟草叶片中通过基因枪的方法瞬间表达重组CP和RPS29发现重组CP改变了RPS29的定位,并且共同定位于胞质中。我们推测在感病烟草中RPS29作为介导宿主识别重组外壳蛋白诱导NIHR的媒介。 第二部分一种新的以TMV为载体的VIGS系统的建立 病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)是一项利用植物病毒为载体的RNA介导的转录后基因沉默(post transcriptional gene silencing,PTGS)技术。烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus,TMV)是第一个被人们用于VIGS的病毒载体。通过将目标基因DNA片段直接插入到TMV外壳蛋白(coat protein,CP)终止密码子下游从而构建了一种不同于以往TMV沉默载体的新的TMV沉默系统,并对该系统的沉默效率和稳定性进行了初步的研究。