端粒的缩短和端粒酶的激活在细胞衰老、永生化、和肿瘤形成过程中的作用已被证实并受到广泛关注，端粒酶的活化被认为是恶性肿瘤细胞无限增殖的分子基础，已证实绝大多数恶性肿瘤细胞中有端粒酶的活性表达，而人正常体细胞中，除生殖细胞，造血干细胞等分裂旺盛的组织中有可检测到的端粒酶活性外无端粒酶表达。因此，端粒酶可以作为恶性肿瘤治疗的理想靶点，反义hTR可专一封闭端粒酶RNA模板中与端粒及其周围序列互补的核苷酸片段，最终封闭或抑制端粒酶的活性表达，导致细胞端粒长度无法维持，激活细胞衰老途径，启动凋亡进程或引起细胞周期阻滞。 口腔鳞状细胞癌(OSCC)和涎腺腺样囊性癌(SACC)是口腔科常见的恶性肿瘤，严重危害人的健康，但其晚期治疗尚存在局限性。本实验拟在探讨端粒酶亚单位在OSCC和SACC中的表达情况，分析端粒酶与细胞增殖之间的关系，为两种肿瘤端粒酶抑制剂治疗打下基础。并通过体外实验和体内实验的建立，为OSCC和SACC的反义hTR基因治疗提供了初步的实验室依据。本实验做了以下几方面的工作并得出了如下结果： 1．检测了hTR在SACC和正常腮腺中的表达，发现SACC中hTR较正常腮腺显著增高(P＜0.001)，hTR的表达与肿瘤分型有关(P＜0.05)，同时各型中hTR表达变化与PCNA呈正相关(P＜0.05)。端粒酶的活性表达与细胞增殖核抗原的相关性表明端粒酶表达细胞多处于细胞分裂高峰，也预示端粒酶与细胞周期、细胞周期调控因于之间可能有种种联系。 刃回翠区大学刃士学位论文二．分别检测了hTRT在OSCC、上皮异常增生、正常口腔远癌上皮中的表达， 阳性率分别为8＊7％、41．7％、20％，三者有显著差异o＜0刀1），盯RT表 达水平与P＊＊A表达有关，与肿瘤分级无关o＞0刀5卜端粒酶在口腔粘膜 癌前病变的诊断中可能具有重要价值，端粒酶亚基在两种肿瘤中的活性 表达使抑制端粒酶的肿瘤治疗成为可能。3．用脂质体介导基因转染方法将表达反义端粒酶RNA的真核表达质粒 PBBSZ12－ahTR转入腺样囊性癌细胞系Sacc83和舌鳞癌细胞系Tcasll3， 经潮霉素筛选和ahTR原位杂交鉴定，转染后的Sacc83细胞在20天内全 部死亡，TUNEL原位凋亡检测和透射电镜观察发现大量凋亡细胞，hTR 和PCNA表达减弱，裸鼠移植瘤内基因注射实验发现试验组注射部位瘤 体塌陷，切片HE染色见大量凋亡细胞，与对照组有明显差异。4．PBBSZ12－ahTR转染的Tea8113细胞系（Tea8113－ahTR）生长减缓但仍能 传代，经鉴定后收集第四、五代转染后细胞并设对照，经流式细胞仪检 测，Teasll3－ahTR较母代细胞 GdG；期细胞增加，S期细胞减少，PI指 数下降，有亚二倍体凋亡峰的出现，证实反义hTh可引起细胞周期G； 期阻滞并有诱导凋亡的作用。转染后细胞周期蛋白 pZI表达增加，端粒 酶活性下降，hTR表达下降，表明反义hTR通过封闭端粒酶模板改变了 端粒酶活性和某些细胞周期蛋白的表达。裸鼠移植瘤形成实验表明， Teasll3－ahTR细胞成瘤率下降，成瘤时间延长，瘤体抑制率增加，表明 封闭端粒酶模板使肿瘤的生长、侵袭特性受到了一定抑制。 以上实验可见，端粒酶在OSCC和SACC的发生发展中可能起着重要的作用，端粒酶抑制剂反义hTh抑制端粒酶的表达影响了细胞增殖、诱导细胞凋亡，在OSCC和SACC的治疗中可能具有潜在的应用前景。