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桑树是家蚕的主要食物,随着桑树资源的多元开发及其在生态治理上的应用,桑产业已经成为现代蚕桑产业体系的重要组成部分。桑细菌性枯萎病是由桑青枯菌或桑肠杆菌属侵染桑树维管束引发桑树全株性死亡的病害,对我国蚕桑产业有严重危害。而且,阴沟肠杆菌引起桑树枯萎病的田间症状与青枯雷尔氏菌引发的田间症状相差不大且很难区分。因此,对阴沟肠杆菌与青枯雷尔氏菌发病机制及相互关系的研究将为桑树枯萎病的防治提供新的思路。本研究采集了广西、广东、海南三个地区的桑枯萎病病株和根际土壤共80份样本,对各样本进行PCR检测确认后,按照柯赫氏法则分离出病原菌并进行回感实验。同时,采用高通量测序技术对柳城县和融安县的8份样本进行DNA测序分析,获得了桑源阴沟肠杆菌全基因组序列。论文获得的主要结果如下:(1)利用自设引物5F/5R和青枯菌特异引物AU749/AU750分别对收集的广西、广东以及海南地区的所有样本进行PCR检测,其中44份广西地区样本、18份广东地区样本、7份海南地区样本中检测到青枯雷尔氏菌和阴沟肠杆菌。(2)采用TTC培养基对以上检测到病原菌的样本进行病原菌培养和分离,同时分离得到青枯雷尔氏菌和阴沟肠杆菌;在37℃、湿度85%的环境下进行回感实验,结果发现青枯雷尔氏菌和阴沟肠杆菌引发桑树的枯萎症状相似,其中阴沟肠杆菌为桑枯萎病的主要致病菌;利用高通量测序技术对其中的8份样本进行DNA测序分析,结果显示劳尔氏菌属和肠杆菌属细菌同时存在。三个结果均表明,桑树枯萎病可能由阴沟肠杆菌和青枯雷尔氏菌共同引发。(3)使用三代测序PacBio技术对3株桑源阴沟肠杆菌进行全基因组测序,桑源阴沟肠杆菌基因组大小4.73M bp,GC比例占56.05%,编码4600个基因;基于hsp60,rpoB和gyrB基因序列,对3株桑源阴沟肠杆菌(LC01;XC01;KQ01)亲缘关系进行分析,菌株XC01、菌株KQ01与桑肠杆菌属于同一支,而LC01菌株属于另外一支;通过对桑源阴沟肠杆菌全基因组序列的对比分析,获得其特异基因序列(2191639-2193771 bp)。(4)基于桑源阴沟肠杆菌的r DNA序列和特异基因序列(2191639-2193771 bp),设计并优化了LAMP引物组,建立了桑源阴沟肠杆菌的LAMP检测方法,可通过肉眼直接观察结果,可以直接用于田间检测。本研究将高通量测序技术用于桑枯萎病病原的分析和鉴定,首次对桑阴沟肠菌株进行了全基因组测序,并分析找到特异基因序列;建立了检测桑源阴沟肠杆菌的LAMP检测技术(专利号申请号:201711281274.2;专利申请号:201810326627.4)。